本文選題：cDNA + 文庫(kù)　； 參考：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2017年03期

【摘要】：目的構(gòu)建滅蚊真菌-貴陽(yáng)腐霉Pythiumsp.GY1938菌株cDNA文庫(kù),為進(jìn)一步篩選和克隆GY1938菌株特異表達(dá)基因奠定基礎(chǔ)。方法以GY1938菌絲體為材料,液氮研磨法制備總RNA并分離純化mRNA,應(yīng)用SMARTer技術(shù)將LD-PCR法合成并分級(jí)純化的ds cDNA連接至pSMART2IFD載體,電穿孔法轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌HST08,構(gòu)建GY1938菌株cDNA文庫(kù),進(jìn)行滴度、重組率和重組片段大小等文庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)。結(jié)果檢測(cè)GY1938菌株cDNA文庫(kù)滴度達(dá)1.36×106 cfu/ml,重組率為98%,插入片段長(zhǎng)度約為300~2 500bp。結(jié)論成功構(gòu)建了較為理想的貴陽(yáng)腐霉GY1938菌株cDNA文庫(kù),該文庫(kù)可用于新基因的篩選、克隆和功能研究。
[Abstract]:Objective to construct the cDNA library of Pythiumsp.GY1938 strain of Pythium Guiyang, which is a fungicidal fungus, and to establish the foundation for further screening and cloning the specific expression gene of GY1938 strain. Methods using GY1938 mycelium as material, total RNA was prepared by liquid nitrogen grinding method and purified mRNAs were isolated and purified. DS cDNA synthesized by LD-PCR method was ligated to pSMART2IFD vector by SMARTer technique, and transformed into Escherichia coli HST08 by electroporation. CDNA library of GY1938 strain was constructed. The quality of library such as titer, recombination rate and size of recombinant fragment were detected. Results the titer of cDNA library of GY1938 strain was 1.36 脳 10 ~ 6 cfur / ml, the recombination rate was 98 and the length of inserted fragment was about 300 ~ 2 500 BP. Conclusion the cDNA library of GY1938 strain of Pythium Guiyang was successfully constructed, which could be used for screening, cloning and functional study of new genes.
【作者單位】： 成都醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;成都醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)系;成都醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院;成都醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心;
【基金】：四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(No.2015JY0205) 國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目(No.201313705003,201313705007,201413705005) 成都醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(No.CXJS201309) 四川省教育廳項(xiàng)目(No.13ZB0220) 四川省衛(wèi)生廳項(xiàng)目(No.130302,130298)
【分類號(hào)】：Q78;R184.31

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本文編號(hào)：1887169