本文關鍵詞： 百日咳 感染率 流行病學 家庭聚集性 nPCR結合rPCR方法　出處：《中國疾病預防控制中心》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景百日咳是由百日咳鮑特菌(Bordetella pertussis)感染引起的一種疫苗可預防的急性呼吸道傳染病,是兒童呼吸道感染最為常見的疾病之一,病程�？沙掷m(xù)幾個星期甚至更久。其典型的臨床表現(xiàn)為陣發(fā)性痙攣性咳嗽。百日咳毒素(PT-IgG)抗體是百日咳特異性抗體,接種疫苗和自然感染免疫后不可終身免疫,無免疫力的人群普遍易感,嬰幼兒及兒童感染后病情較成年人嚴重。近年來,全球百日咳重現(xiàn),發(fā)病率呈上升趨勢。有研究認為,我國的百日咳發(fā)病率可能被嚴重低估,可能高達95%的感染者未被診斷,特別是青少年和成人病例較以往明顯增多,未發(fā)現(xiàn)的感染者是導致百日咳流行的極大隱患。長期以來,百日咳雖然表現(xiàn)為嬰幼兒發(fā)病,但發(fā)病癥狀不典型和傳播模式的改變,顯示了以青少年及成人傳播給嬰幼兒為主,而健康從業(yè)人員的人群很大程度上代表了成人人群的百日咳感染和攜帶的情況,同時針對百日咳鮑特菌檢測流感樣病例,可了解嬰幼兒和兒童中百日咳的感染情況,對嬰幼兒可能感染和發(fā)病有較好的預警作用。百日咳鮑特菌傳統(tǒng)的檢測技術主要包括病原菌培養(yǎng)、血清毒素抗體檢測和實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-time,rPCR)檢測百日咳特異性基因IS481,由于培養(yǎng)敏感性低,而血清抗體檢測適用于百日咳既往感染的診斷和接種疫苗后抗體的效果評價,rPCR檢測方法雖然敏感性和特異性都較高,但在實際應用過程中,因標本采集、運輸?shù)拳h(huán)節(jié)導致的咽拭子含菌量減少會影響核酸檢測的敏感性,尤其是在進行健康人群帶菌調(diào)查時仍存在不足�；谏鲜鲈�,本課題在現(xiàn)有的rPCR檢測方法的基礎上,進一步建立巢式聚合酶鏈反應(Nested PCR,nPCR)結合rPCR的檢測方法應用于百日咳鮑特菌的檢測,同時結合血清學檢測方法以隨州市辦理健康證的從業(yè)人員及臨床疑似百日咳病例和流感樣病例為研究對象,對湖北省隨州市百日咳感染及流行現(xiàn)狀進行調(diào)查研究。研究目的采用現(xiàn)況研究,以隨州市辦理健康證的從業(yè)人員、流感樣病例及臨床疑似百日咳病例為研究對象,了解隨州市人群百日咳感染現(xiàn)狀和發(fā)病情況,研究其流行特征,為今后百日咳監(jiān)測和防控提供基礎信息。研究方法針對百日咳鮑特菌特異基因IS481設計合適的外引物并優(yōu)化反應條件,建立nPCR結合rPCR的方法,并結合已有的血清抗PT-IgG抗體檢測方法開展隨州市人群百日咳的感染及流行現(xiàn)狀研究。結果(一)本研究建立的nPCR結合rPCR的方法分別檢測肺炎鏈球菌ATCC49619、流感嗜血桿菌M5216、金黃色葡萄球菌ATCC35923、肺炎支原體12039、卡他莫拉菌ATCC25240、腦膜炎奈瑟菌CMCC29061、霍氏鮑特菌ATCC700053、副百日咳鮑特菌ATCC15311、支氣管炎鮑特菌ATCC10580、百日咳鮑特菌ATCC9797,除百日咳鮑特菌、霍氏鮑特菌外,其他均呈陰性,說明針對鮑特菌屬的檢測,本方法特異性較高。測定百日咳鮑特菌ATCC9797核酸濃度并調(diào)整至10ng/μl倍比(10倍)稀釋后在熒光定量PCR儀上進行擴增反應,兩種方法的檢測效率不同,rPCR的檢測下限結果為10-4ng/μl,而nPCR結合rPCR方法的檢測下限為10-6ng/μl,且后者的Ct值更小。兩種方法相比,本研究建立的方法敏感性更高,可用于調(diào)查人群百日咳鮑特菌的感染率,同時為臨床百日咳的診斷提供依據(jù)。(二)354份流感樣病例咽拭子標本共有流感病毒陽性124份,對所有的流感樣病例應用本次研究建立的方法共檢出百日咳鮑特菌陽性17例,其中流感病毒陽性標本中檢出百日咳鮑特菌8份,流感病毒陰性標本中檢出百日咳鮑特菌9份,而單獨針對百日咳鮑特菌的rPCR方法檢測流感病毒陽性標本,檢出百日咳鮑特菌1例,流感病毒陰性標本中未檢出百日咳鮑特菌。34份臨床疑似百日咳病例中檢出百日咳鮑特菌陽性12例。508名健康從業(yè)人員抗血清PT-IgG抗體檢測陽性18名,近期感染率為3.54%,幾何平均濃度(GMC)為 4.67IU/ml。人群中抗 PT-IgG 抗體濃5 IU/ml 占 50.98%(259/508),而國際上常認為人群中百日咳抗PT-IgG抗體濃度5 IU/ml時為易感人群,以27～36歲人群易感性最高,抗體陽性率為4.40%,GMC為3.59IU/ml。各年齡組之間、地區(qū)之間及性別之間抗體陽性率無顯著性差異;幾何平均濃度(GMC)在地區(qū)之間及性別之間無顯著性差異,但在各年齡組之間有顯著性差異。說明隨州市人群中百日咳易感性較高,有發(fā)病流行的潛在危險。(三)監(jiān)測臨床疑似百日咳病例,首次發(fā)現(xiàn)一起由成人感染百日咳傳播給嬰幼兒導致的家庭聚集性發(fā)病。結論建立的nPCR結合rPCR方法敏感性和特異性均較高,優(yōu)于rPCR,可用于人群百日咳的感染率調(diào)查,研究發(fā)現(xiàn),湖北省隨州市人群中存在百日咳的感染和流行,人群抗體水平較低,百日咳的易感性較高,有潛在的發(fā)病風險,與隨州市每年的法定傳染病報告系統(tǒng)報道的數(shù)據(jù)相比較,百日咳感染和流行情況存在低估和漏報,成人感染百日咳傳給嬰幼兒導致家庭聚集性發(fā)病的傳播模式,應該引起重視,防止百日咳的傳播流行。
[Abstract]:In recent years , the prevalence of whooping cough among infants and children is higher than that of adults . In recent years , there is a tendency for the detection of whooping cough in infants and adults . The results showed that the positive rate of anti - PT - IgG antibody was 10 - 4ng / 渭l . The results showed that the positive rate of anti - PT - IgG antibody was 10 - 4ng / 渭l . The positive rate of anti - PT - IgG in the population was 4.67 IU / ml . Conclusion The nPCR combined with rPCR has higher sensitivity and specificity than rPCR , which is superior to rPCR and can be used to investigate the infection rate of pertussis .

【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R516.6;R181.3

【參考文獻】

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