本文關鍵詞：上海一株豬源隱孢子蟲的蟲種鑒定及遵義市人畜隱孢子蟲感染的初步調查

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【摘要】：目的：1、選擇一種高效、簡潔快速、價格合理的糞便微量DNA提取試劑盒。2、上海一株豬源隱孢子蟲的蟲種鑒定。3、初步了解遵義部分腹瀉兒童、腫瘤病人及家畜的隱孢子蟲感染情況及其流行特征。 方法：1、用三種不同的試劑盒提取糞便DNA,通過比較所提取DNA的濃度、純度、提取率及巢式PCR產物等評價三種糞便微量DNA提取試劑盒。2、上海一份豬糞樣品經改良-抗酸染色確定隱孢子蟲感染,測量卵囊大�。惶崛NA后經18SrRNA基因巢式PCR擴增,擴增產物測序后用Blast和MEGA軟件進行同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析。3、采集遵義醫(yī)學院附院兒科腹瀉患者及腫瘤科病人、周邊鄉(xiāng)鎮(zhèn)狗、牛、豬糞便標本共582份,改良抗酸染色檢測隱孢子蟲卵囊,所有樣本提取DNA后經18SrRNA基因巢式PCR擴增。 結果：1、Genmed試劑盒提取的DNA濃度最高、PCR產物條帶最亮,但提取時間相對過長,價格相對過高。天根試劑盒提取的DNA純度最高,DNA濃度及價格適中,提取時間最短。碧云天試劑盒提取的DNA純度、濃度均不高且提取時間最長,但價格最便宜。2、上海豬糞樣品經改良-抗酸染色后卵囊呈玫瑰紅色、圓形,其大小為(4.90±0.83)μm X (4.52±0.73)μm;通過18SrRNA基因分析,上海豬源隱孢子蟲與巴西一株隱孢子蟲豬基因型Ⅱ(Cryptosporidium sp. pig genotypeⅡ)同源性為100%,種系發(fā)育樹上兩者在同一分支。3、遵義采集的所有人畜糞便標本經改良抗酸染色,顯微鏡觀察均未發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲卵囊；所有樣本提取DNA經18SrRNA巢式PCR均未擴增出特異性片段。 結論：1、Genmed試劑盒提取糞便微量DNA最靈敏；天根試劑盒提取DNA適于純度要求較高的分子生物學研究。2、上海豬源隱孢子蟲鑒定為隱孢子蟲豬基因型Ⅱ{Cryptosporidium sp. pig genotypeⅡ)，，3、通過對遵義地區(qū)部分腹瀉兒童、腫瘤病人及家畜糞便進行檢查,尚未發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲感染。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R181.3;S855.9

【參考文獻】

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本文編號：1147219