本文關(guān)鍵詞：沉默α-catulin基因的人舌鱗狀細(xì)胞癌TSCCA細(xì)胞模型的建立

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【摘要】：目的:設(shè)計并構(gòu)建α-catulin-shRNA表達(dá)載體,建立沉默α-catulin基因的人舌鱗狀細(xì)胞癌(TSCC),TSCCA細(xì)胞模型并觀察其沉默效率,為TSCC的基因治療提供依據(jù)。方法:TSCCA細(xì)胞分為轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染shcatu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4質(zhì)粒)、陰性對照組(轉(zhuǎn)染sh-nc質(zhì)粒)及空白對照組(未處理)。根據(jù)GenBank上獲取的α-catulin mRNA序列,設(shè)計并合成4條α-catulin-shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體。測序鑒定后,經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo),將3組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的人TSCCA細(xì)胞中,熒光顯微鏡觀察各組TSCCA細(xì)胞中綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá);采用RT-PCR和Western blotting法檢測TSCCA細(xì)胞中α-catulin基因的mRNA及其蛋白相對表達(dá)水平及沉默效率。結(jié)果:測序鑒定表明成功構(gòu)建了編碼α-catulin的shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體sh-catu1、shcatu2、sh-catu3和sh-catu4;轉(zhuǎn)染TSCCA細(xì)胞后,熒光顯微鏡下觀察到表達(dá)載體在細(xì)胞中成功表達(dá)。RT-PCR檢測,與空白對照組比較,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中α-catulin mRNA表達(dá)水平降低(P0.05),沉默效率升高(P0.05);與陰性對照組比較,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中α-catulin mRNA相對表達(dá)水平降低(P0.05),沉默效率升高(P0.05)。Western blotting法檢測,與空白對照組比較,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中α-catulin蛋白相對表達(dá)水平降低(P0.05),沉默效率升高(P0.05);與陰性對照組比較,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中α-catulin蛋白相對表達(dá)水平降低(P0.05),沉默效率升高(P0.05)。結(jié)論:成功構(gòu)建α-catulin-shRNA重組質(zhì)粒載體,建立了沉默α-catulin基因的人TSCC的TSCCA細(xì)胞模型,為研究α-catulin基因在TSCC發(fā)病機制中的作用提供了細(xì)胞模型。
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔科;
【關(guān)鍵詞】： 癌 鱗狀細(xì)胞 舌腫瘤 α-catulin基因 TSCCA細(xì)胞 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
【基金】：遼寧省科技廳自然科學(xué)基金資助課題(2015020333)
【分類號】：R739.86
【正文快照】： 口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cellcarcinoma,OSCC)是世界上常見的惡性腫瘤,占口腔癌總數(shù)的90%以上[1],其中舌鱗狀細(xì)胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)為最常見的OSCC。目前TSCC的治療多采用以手術(shù)治療為主、術(shù)后輔以放化療的綜合治療方法,但效果并不理想,預(yù)后較差,

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王曉峰;孔晨飛;王偉;張?zhí)旆?;Syndecan1慢病毒干涉質(zhì)粒的構(gòu)建及其對舌鱗癌CAL27細(xì)胞增殖的影響[J];中國實驗診斷學(xué);2015年09期

2 Lan Zou;Tian-Run Liu;An-Kui Yang;;Metabolic syndrome is associated with better prognosis in patients with tongue squamous cell carcinoma[J];Chinese Journal of Cancer;2015年04期

3 史毅;吳偉忠;金曉紅;張斌;;α-catulin和E-cadherin在舌鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年04期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 韓春耀;張斌;馬雪;劉明媛;薛中原;郝麗靜;葛樹卿;;沉默α-catulin基因的人舌鱗狀細(xì)胞癌TSCCA細(xì)胞模型的建立[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2016年03期

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 尚靜;房寧;滕思瑩;崔香艷;汪欣;;喉鱗狀細(xì)胞癌組織中Snail和E-cadherin的表達(dá)及其意義[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年02期

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本文編號：910217