本文關(guān)鍵詞：IL-24聯(lián)合自噬抑制劑影響口腔鱗癌生長作用的研究

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【摘要】：口腔鱗狀細(xì)胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤之一,惡性程度較高,具有容易向周圍神經(jīng)、腺體、肌肉及骨組織廣泛浸潤的特點(diǎn),且易發(fā)生早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。傳統(tǒng)的治療手段主要包括手術(shù)治療、放射治療及化學(xué)藥物治療等。手術(shù)治療在切除腫瘤的同時(shí),往往會造成大面積的顏面部組織缺損,給患者的身心帶來極大的創(chuàng)傷。而放療與化療在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對正常細(xì)胞也會造成損傷,并且易引發(fā)免疫功能下降、骨髓抑制、肝腎損害、甚至死亡等嚴(yán)重并發(fā)癥。因此,尋求一種新的、有效的治療方法是目前治療口腔鱗狀細(xì)胞癌的研究熱點(diǎn)。伴隨著細(xì)胞和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,基因療法為腫瘤治療提供了新的思路。白細(xì)胞介素24(Interleukin-24,IL-24)是一種新型的具有腫瘤特異性的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子,其不僅可抑制腫瘤細(xì)胞的生長,誘導(dǎo)其凋亡,還可提高腫瘤細(xì)胞對放化療的敏感性、抑制腫瘤內(nèi)血管生成及誘導(dǎo)宿主發(fā)生抗腫瘤相關(guān)的免疫應(yīng)答反應(yīng),而對正常細(xì)胞并沒有明顯的損傷作用。但是也發(fā)現(xiàn),與腫瘤放化療類似,腫瘤細(xì)胞對IL-24時(shí)常會產(chǎn)生治療抗性,腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的治療抗性是臨床非手術(shù)治療失敗導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)的重要原因之一。近年研究顯示,細(xì)胞自噬(Autophagy)可以將腫瘤細(xì)胞受損的細(xì)胞器及一些大分子物質(zhì)運(yùn)送至溶酶體中降解,從而為腫瘤細(xì)胞的存活提供一種自我保護(hù)機(jī)制,由此為腫瘤細(xì)胞逃避放療及化療引起的損傷而繼續(xù)存活提供了保障。因此,細(xì)胞自噬作為腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制之一被人們所廣泛關(guān)注,并試圖通過控制細(xì)胞自噬實(shí)現(xiàn)臨床腫瘤治療的有效性。雖然IL-24對多種惡性腫瘤均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用,但是對口腔鱗狀細(xì)胞癌而言IL-24是否同樣可以抑制其生長以及在給藥過程中可否誘發(fā)耐藥均無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本文為探討口腔鱗狀細(xì)胞癌的IL-24生物治療可行性,從IL-24的有效濃度、細(xì)胞內(nèi)表達(dá)特征、抑制生長的作用機(jī)制做了系統(tǒng)的分析,并進(jìn)一步深入研究了IL-24作用口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞及腫瘤組織后對細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)情況,同時(shí)探討了IL-24聯(lián)合細(xì)胞自噬抑制劑3-MA用于抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌增殖和生長的有效性。在研究中,首先在確定新型雜合病毒載體Ad LTR2EF1α以及重組了IL-24基因的Ad LTR2EF1α-IL-24重組體感染細(xì)胞的有效濃度的基礎(chǔ)上,分析IL-24重組體表達(dá)能力及重組蛋白的類型,證實(shí)該重組體可有效表達(dá)細(xì)胞內(nèi)儲留型及分泌型兩種類型的IL-24蛋白。進(jìn)而,將Ad LTR2EF1α-IL-24感染人口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系KB細(xì)胞,以探討IL-24對口腔鱗癌細(xì)胞的生長抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ad LTR2EF1α-IL-24可以有效的抑制KB細(xì)胞增殖和小鼠KB細(xì)胞移植瘤的生長,而作為正常細(xì)胞對照的人永生化上皮細(xì)胞Ha Ca T細(xì)胞及移植瘤鼠的肝臟,心臟,肺臟等正常器官而言均無明顯的損傷作用。此結(jié)果表明,IL-24可以有效的抑制口腔鱗癌細(xì)胞的增殖及生長而對正常細(xì)胞無明顯毒副作用。為了探討IL-24抑制口腔鱗癌細(xì)胞增殖和腫瘤生長的機(jī)制,研究檢測了口腔鱗癌細(xì)胞系KB體外感染IL-24重組體和KB細(xì)胞荷瘤鼠瘤周注射IL-24后腫瘤細(xì)胞的增殖活性、細(xì)胞周期變化、凋亡狀態(tài)、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量及表達(dá)活性的變化。結(jié)果表明,IL-24可以增強(qiáng)口腔鱗癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)量及表達(dá)活性,從而增強(qiáng)口腔鱗癌細(xì)胞的凋亡,進(jìn)而抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌的增殖及生長。在研究以上細(xì)胞生物學(xué)作用的同時(shí),本研究深入分析了IL-24感染KB細(xì)胞后,KB細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征,結(jié)果發(fā)現(xiàn)用IL-24感染的KB細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的具有雙層膜的囊泡狀結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步采用透射電鏡觀察、GFP-LC3轉(zhuǎn)染、MDC染色和western blot檢測自噬相關(guān)蛋白等方法,證實(shí)這些具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡即為自噬體。由此表明,IL-24在誘導(dǎo)KB細(xì)胞凋亡抑制其增殖和瘤體生長的同時(shí),也具有誘導(dǎo)KB細(xì)胞的細(xì)胞自噬作用。由此提示KB細(xì)胞可以通過保護(hù)性自噬作用對IL-24產(chǎn)生抵抗,從而影響IL-24對KB細(xì)胞及其腫瘤組織的有效殺傷作用。為了解決IL-24重組蛋白在抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌增殖生長的同時(shí)伴發(fā)的保護(hù)性細(xì)胞自噬問題,本文在研究中探討了IL-24聯(lián)合細(xì)胞自噬抑制劑3-MA用于抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌增殖和生長的有效性,以期通過抑制自噬進(jìn)一步提高IL-24抑制腫瘤的作用。實(shí)驗(yàn)應(yīng)用經(jīng)典的自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)聯(lián)合IL-24處理口腔鱗狀細(xì)胞癌KB細(xì)胞,分析了聯(lián)合應(yīng)用自噬抑制劑后KB細(xì)胞的增殖活性、細(xì)胞周期阻滯效果和移植瘤生長能力。結(jié)果表明,自噬抑制劑可以有效的增加IL-24誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,增強(qiáng)IL-24對口腔鱗狀癌細(xì)胞的生長抑制作用。綜上所述,本研究通過不同方法從不同角度闡述了IL-24對口腔鱗狀細(xì)胞癌的生長抑制作用,并證明促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌的凋亡是IL-24抑制腫瘤細(xì)胞增殖及腫瘤生長的主要機(jī)制。同時(shí),本研究還發(fā)現(xiàn)IL-24可以誘發(fā)口腔鱗狀細(xì)胞癌的自噬活性,深入探討了抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌的保護(hù)性自噬可以提高IL-24對口腔鱗狀細(xì)胞癌的生長抑制作用。這些結(jié)果將為IL-24及自噬抑制劑聯(lián)合應(yīng)用于治療口腔鱗狀細(xì)胞癌的臨床研究提供可靠的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：口腔鱗狀細(xì)胞癌 IL-24 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞自噬 基因治療
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.85
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-15
• 第1章 緒論15-36
• 1.1 課題背景及研究的目的和意義15-16
• 1.2 口腔鱗狀細(xì)胞癌16-26
• 1.2.1 口腔鱗狀細(xì)胞癌的易感因素16-18
• 1.2.2 口腔鱗狀細(xì)胞癌的分子生物學(xué)研究進(jìn)展18-24
• 1.2.3 口腔鱗狀細(xì)胞癌的臨床治療24-26
• 1.3 IL-24與腫瘤的基因治療26-30
• 1.3.1 IL-24的結(jié)構(gòu)27
• 1.3.2 IL-24在人體中的表達(dá)27-28
• 1.3.3 IL-24的受體28
• 1.3.4 IL-24的抗腫瘤作用28-30
• 1.4 細(xì)胞自噬30-33
• 1.4.1 自噬與腫瘤30
• 1.4.2 自噬與腫瘤細(xì)胞的耐藥30-32
• 1.4.3 自噬與腫瘤細(xì)胞凋亡32-33
• 1.5 本文的主要研究內(nèi)容和技術(shù)路線33-36
• 1.5.1 本文的主要研究內(nèi)容33-34
• 1.5.2 本研究的技術(shù)路線34-36
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法36-50
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料36-39
• 2.1.1 細(xì)胞系及原代細(xì)胞36
• 2.1.2 病毒載體36
• 2.1.3 主要儀器36-37
• 2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑37-38
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)用小鼠38
• 2.1.6 主要試劑配置38-39
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法39-48
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)39-40
• 2.2.2 病毒感染40-41
• 2.2.3 最佳轉(zhuǎn)染濃度測定41
• 2.2.4 Ad LTR2EF1α-EGFP載體轉(zhuǎn)基因表達(dá)測定41-42
• 2.2.5 Ad LTR2EF1α-IL-24載體轉(zhuǎn)基因表達(dá)測定42
• 2.2.6 IL-24外分泌表達(dá)檢測42-43
• 2.2.7 MTT檢測細(xì)胞活性43
• 2.2.8 Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡43
• 2.2.9 TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡43-44
• 2.2.10 細(xì)胞周期檢測44-45
• 2.2.11 MDC染色檢測自噬體45
• 2.2.12 透射電鏡45
• 2.2.13 GFP-LC3 染色檢測自噬體45-46
• 2.2.14 免疫印跡（Western blotting）46-48
• 2.2.15 動物實(shí)驗(yàn)48
• 2.2.16 免疫組化48
• 2.2.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析48
• 2.3 本章小結(jié)48-50
• 第3章 IL-24重組體在OSCC細(xì)胞中的表達(dá)及其作用50-70
• 3.1 引言50
• 3.2 IL-24重組體最佳感染濃度測定50-53
• 3.3 IL-24在OSCC細(xì)胞中的表達(dá)53-59
• 3.3.1 IL-24重組體在OSCC細(xì)胞中的基因轉(zhuǎn)錄情況53-55
• 3.3.2 IL-24重組體感染后OSCC細(xì)胞中IL-24蛋白的表達(dá)情況55-59
• 3.4 IL-24重組體抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌的生長59-69
• 3.4.1 IL-24重組體抑制口腔鱗癌細(xì)胞的增殖59-61
• 3.4.2 IL-24重組體對口腔鱗癌細(xì)胞周期的影響61-63
• 3.4.3 IL-24重組體抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌移植瘤的生長63-66
• 3.4.4 IL-24重組體對荷瘤裸鼠正常臟器形態(tài)的影響66-69
• 3.5 本章小結(jié)69-70
• 第4章 IL-24影響OSCC細(xì)胞凋亡與自噬作用的研究70-86
• 4.1 引言70
• 4.2 IL-24促進(jìn)OSCC細(xì)胞的凋亡70-73
• 4.3 IL-24增強(qiáng)OSCC細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)及活性73-75
• 4.4 IL-24提高OSCC細(xì)胞的自噬水平75-84
• 4.4.1 IL-24重組體感染OSCC細(xì)胞誘發(fā)細(xì)胞自噬76-81
• 4.4.2 IL-24引起自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的增加81-84
• 4.5 本章小結(jié)84-86
• 第5章 抑制自噬增強(qiáng)IL-24對OSCC細(xì)胞的增殖抑制作用86-103
• 5.1 引言86
• 5.2 自噬抑制劑 3-MA增強(qiáng)IL-24對OSCC細(xì)胞的生長抑制作用86-94
• 5.2.1 IL-24聯(lián)合 3-MA對KB細(xì)胞增殖活性的影響86-88
• 5.2.2 IL-24聯(lián)合 3-MA對KB細(xì)胞周期的影響88-90
• 5.2.3 IL-24聯(lián)合 3-MA對KB細(xì)胞移植瘤生長的影響90-94
• 5.3 3-MA增強(qiáng)IL-24對OSCC細(xì)胞增殖抑制作用機(jī)制的研究94-99
• 5.3.1 IL-24聯(lián)合 3-MA提高KB細(xì)胞的凋亡水平94-97
• 5.3.2 IL-24聯(lián)合 3-MA提高KB細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)量及活性97-99
• 5.4 自噬與凋亡在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的內(nèi)在聯(lián)系99-102
• 5.5 本章小結(jié)102-103
• 結(jié)論103-105
• 參考文獻(xiàn)105-118
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其它成果118-120
• 致謝120-121
• 個(gè)人簡歷121

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1 劉斌;唐靜;袁敏;畢樹立;李世英;;自噬在血管性癡呆發(fā)病中的作用研究[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2013年06期

2 劉明;周承志;鄭麗霞;歐陽銘;;自噬在表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑耐藥中的作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年16期

3 ;信息快遞[J];肝臟;2012年03期

4 劉飛飛;楊安幫;溫豐標(biāo);劉東雷;楊洋;吳愷;趙松;;自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤對順鉑誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞凋亡的影響[J];中國老年學(xué)雜志;2013年06期

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6 王路喬;黃波;黃茶花;王伶;程曉曙;;自噬抑制劑促進(jìn)缺氧誘導(dǎo)的大鼠乳鼠心肌細(xì)胞凋亡[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2014年02期

7 陳英,樸英杰;基因芯片檢測自噬與凋亡的基因表達(dá)譜改變[J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2004年02期

8 劉曼;何月;張吉翔;;自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤對肝星狀細(xì)胞增殖活化的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年08期

9 劉川;王華芹;高雁艷;林蓓;;MG132聯(lián)合自噬抑制劑對A2870卵巢癌細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2013年03期

10 金鎮(zhèn)勛;蘭汝春;王菲;董長松;徐冶;;自噬抑制劑3-MA對乳胞素抑制胃癌BGC-823細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制[J];中國老年學(xué)雜志;2012年05期

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1 陳英;樸英杰;;自噬抑制劑對凋亡誘導(dǎo)影響的基因表達(dá)譜改變[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

2 張樂玲;倪宏;閆建珍;陶陸陽;;自噬抑制劑E-64d對發(fā)育期驚厥所致認(rèn)知損傷的調(diào)節(jié)及信號通路研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

3 孫奇;陳情情;田甜;倪宏;;自噬抑制劑CBI對新生期驚厥所致遠(yuǎn)期腦損傷的干預(yù)及分子機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2012年

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3 邵珊;新型自噬抑制劑spautin-1在Ph陽性白血病治療中的作用[D];上海交通大學(xué);2014年

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1 段世鵬;自噬抑制劑減少禽呼腸孤病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞及雞胚組織凋亡[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

2 鞏勇;自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤改善新生期驚厥所致學(xué)習(xí)能力損害及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2010年

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4 眭怡群;自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤誘導(dǎo)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞周期阻滯和凋亡[D];蘇州大學(xué);2012年

5 林辰;細(xì)胞自噬在精氨酸酶治療頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中作用及機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

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本文編號：842356