目的：翼外肌在錯(cuò)(?)畸形的發(fā)展及診療的各個(gè)階段中起著重要作用,可以受到外環(huán)境改變的刺激而發(fā)生適應(yīng)性改建。本研究在成功構(gòu)建成肌細(xì)胞體外培養(yǎng)—力學(xué)刺激模型的基礎(chǔ)上研究P38MAPK信號(hào)通路在應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡中的作用。 方法：本實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為對(duì)照組和抑制劑組。對(duì)每組細(xì)胞分別施加0小時(shí),6小時(shí),12小時(shí)和24小時(shí)的周期性張應(yīng)力。加力設(shè)備采用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng),加力的力值設(shè)定為15%,每分鐘10循環(huán),每循環(huán)包括3s牽張,3s松弛。應(yīng)用Hoechst33258和光學(xué)顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況；Western Blot檢測信號(hào)通路中P38MAPK蛋白P-P38MAPK蛋白的表達(dá)變化情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用SPSS17.0軟件分析處理。 結(jié)果：光學(xué)顯微鏡可見持續(xù)張應(yīng)力的作用下,骨骼肌成肌細(xì)胞發(fā)生不同程度的凋亡。Hoechst 33258檢測觀察到細(xì)胞受力后細(xì)胞核固縮并出現(xiàn)凋亡小體。RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示隨加力時(shí)間的延長細(xì)胞凋亡率增加(P<0.05),抑制劑SB203580組的凋亡率明顯小于對(duì)照組,且P38MAPK蛋白和P-P3...

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第1章 成肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)及力學(xué)刺激模型的構(gòu)建
    1.1 主要材料與試劑
    1.2 成肌細(xì)胞的體外復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代和凍存
    1.3 成肌細(xì)胞力學(xué)刺激模型的構(gòu)建
第2章 P38MAPK信號(hào)通路在應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡中的作用
    2.1 主要材料與試劑
    2.2 成肌細(xì)胞力學(xué)刺激模型的建立
    2.3 光學(xué)顯微鏡觀察
    2.4 Hoechst 33258染色
    2.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
    2.6 RT-PCR檢測細(xì)胞凋亡
    2.7 Western Blot檢測蛋白表達(dá)情況
    2.8 抑制劑SB203580的應(yīng)用
    2.9 加入抑制劑后成肌細(xì)胞細(xì)胞凋亡和P38MAPK的檢測
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 細(xì)胞種板及力學(xué)刺激模型構(gòu)建
    3.2 細(xì)胞加力后形態(tài)學(xué)改變
    3.3 Hoechst 33258染色結(jié)果
    3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
    3.5 RT-PCR檢測細(xì)胞凋亡
    3.6 Western Blot檢測蛋白表達(dá)情況
第4章 討論
    4.1 成肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)
    4.2 細(xì)胞力學(xué)
    4.3 周期性張應(yīng)力對(duì)翼外肌影響的研究進(jìn)展
    4.4 P38MAPK信號(hào)通路
    4.5 P38MAPK信號(hào)通路與細(xì)胞凋亡的關(guān)系
    4.6 關(guān)于本實(shí)驗(yàn)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3981120