因腫瘤、外傷、放射性骨壞死、骨髓炎、牙周炎或先天疾病等導(dǎo)致的顱頜面骨缺損直接影響口腔頜面部修復(fù)，頜骨缺損修復(fù)時新骨形成的質(zhì)量、速度和長期穩(wěn)定性與種植義齒修復(fù)息息相關(guān)。多年來，臨床醫(yī)師和研究者們嘗試?yán)米泽w或異體骨移植、人工骨移植、細(xì)胞或／和生長因子介導(dǎo)的組織工程技術(shù)、屏障膜及骨牽張等臨床技術(shù)，在修復(fù)頜骨或牙槽骨缺損方面取得了一定的成效。近年來，骨缺損修復(fù)的理念更傾向于——結(jié)合細(xì)胞及活性分子的骨支架材料植入機體后能引導(dǎo)及促進機體自身組織的再生修復(fù)，因此，設(shè)計模仿骨再生生理機制的骨缺損修復(fù)方案至關(guān)重要。根據(jù)顱頜面膜內(nèi)成骨的特點，我們選擇了在骨缺損修復(fù)初期能促進血管再生的堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)，和在骨缺損修復(fù)中后期能調(diào)控其下游信號通路促進新骨再生的信號分子SonicHedgehog(Shh)，目的是通過對這兩種關(guān)鍵因子的調(diào)控，模擬機體骨缺損修復(fù)過程，探尋理想的促頜骨缺損修復(fù)方案。方法是利用腺相關(guān)病毒高效穩(wěn)定的感染效率及四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)對外源基因的開關(guān)作用，構(gòu)建重組病毒rAAV2-Shh及rAAV2-tet-off-bFGF；將兩種病毒共同感染原代培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；繼而將這...

【文章頁數(shù)】：168 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1.1重組質(zhì)拉示意圖

2.2穩(wěn)定細(xì)胞株的建立按GIBCO舊RL產(chǎn)品說明書提供的方法，用Lipofeetamine2000將pSNAV2.0一Shh質(zhì)粒轉(zhuǎn)染六孔板中的BHK一21細(xì)胞，24h后用800m留LG418選擇培養(yǎng)。待抗性克隆生長至孔底面積的二分之一左右時，用胰酶消化，繼續(xù)用G418選擇培養(yǎng)直至....

圖1.1‘ZpBlueseriptSKll一Shh經(jīng)&oRI和介nl雙酶t)J鑒定Ml:DNAMarker2000

3.2重組質(zhì)粒pSNAV2.0一Shh的鑒定PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示能從質(zhì)粒pBltlescriPtsKI卜Sllh_}幾擴增出l.4kb的特異條帶(圖1.1.3);將此特異條帶垂組至lJ質(zhì)粒PSN八VZ.o上幾，構(gòu)建幣組質(zhì)粒psNAVZ.O一Shh;隨淚L挑取轉(zhuǎn)化菌落的陽性克隆....

圖11.5斤oRI和L\.azl雙酶切鑒定重組質(zhì)粒pSNAVZ.o一shrlMl:DN八Marker2000

斤oRI和L\.azl雙酶切鑒定重組質(zhì)粒pSNAVZMl:DN八Marker2000入12:DNANlarker15000l:l直落樣品1中提取的psN八v2.()一shrl2:l宜落樣品2「掃提取的psN八v2.()一sh一13:菌落樣品3，護提取的psN八VZ.o一shh測層....

圖I.16r八AvZ一shll的505一P八GE純度分析

250020001000.5斤oRI和L\.azl雙酶切鑒定重組質(zhì)粒pSNAMl:DN八Marker2000入12:DNANlarker15000l:l直落樣品1中提取的psN八v2.()一2:l宜落樣品2「掃提取的psN八v2.()一3:菌落樣品3，護提取的psN八VZ.o一測....

本文編號：3994720