目的：觀察ⅣfimA型牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis, P. gingivalis)重組菌毛蛋白rFimA對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)表達和分泌致炎細胞因子、粘附分子和趨化因子的影響,探討P. gingivalis及其菌毛蛋白FimA在動脈粥樣硬化(atherosclerosis, As)發(fā)生發(fā)展中的可能作用以及作為牙周炎與As相關(guān)的物質(zhì)基礎(chǔ)的可能。方法：標(biāo)準條件下厭氧培養(yǎng)ⅣfimA型P.gingivalis(W83),收集菌液提取細菌DNA,克�、鬴imA型Pgingivalis(W83)的fimA序列,構(gòu)建fimA的原核表達系統(tǒng)pET-30a-FimA BL21DE3, IPTG誘導(dǎo)表達重組菌毛蛋白rFimA;體外培養(yǎng)HUVEC,待HUVEC單層融合后,分別加入純化后不同濃度的Ⅳ型rFimA,共同培養(yǎng)2h、6h、24h,采用ELISA法測定培養(yǎng)上清液中致炎細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和趨化因子IL-8、MCP-1的分泌量；RT-PCR檢測HUVEC...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1重組融合蛋白構(gòu)建示意圖

達質(zhì)粒命名pET-FimA。Ne()IEcoRI正功i《Iln圖1Fig.l腸激酶作用位點日F皿重組融合蛋白構(gòu)建示意圖ConstrUetiondiagr出舊ofreeombinantfusionProteinXhO甸準繃】既惚H雇耐劫l弓，73)p〔了蔽至引心如功洲__卜，....

圖3重組表達質(zhì)粒載體pET-FimA構(gòu)建流程圖

3.1.3原核表達載體pE卜30a一ilnA構(gòu)建利用基因工程技術(shù)按照圖1至圖3示意構(gòu)建原核表達載體。將PCR產(chǎn)物與pMD18一T載體連接，將10林L連接產(chǎn)物一與200卜tLDHS。感受態(tài)細胞充分混合，置冰上30min，轉(zhuǎn)入42oC金屬浴熱沖擊905，加入室溫的SOC培養(yǎng)基80....

圖8人臍靜脈內(nèi)皮細胞呈現(xiàn)典型鋪路石狀鑲嵌排列Fig.8HUVECshowedt卯ieallyeobblestonemosaiearrangement

倒置顯微鏡下觀察可見，人臍靜脈內(nèi)皮細胞貼壁生長，呈菱形或多角形，邊界清楚，胞漿豐富。胞核為圓形或橢圓形，可見一兩個核仁。細胞生長迅速，2~5天融合成片，單層生長，互不重疊，呈現(xiàn)典型鋪路石狀鑲嵌排列(見圖8)。圖8人臍靜脈內(nèi)皮細胞呈現(xiàn)典型鋪路石狀鑲嵌排列Fig.8HUVECsh....

圖6融合蛋白rFimA與Histag

本文編號：3927383