目的：觀察全骨髓培養(yǎng)法和密度梯度離心法兩種不同分離方法對(duì)羊的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物活性的影響，對(duì)其中生物活性較好的一組進(jìn)行成骨方向的誘導(dǎo)培養(yǎng)，了解骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化過(guò)程中成骨相關(guān)基因動(dòng)態(tài)表達(dá)模式。方法：分別采用全骨髓培養(yǎng)法和密度梯度離心法提取羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD44抗原表達(dá)，Von Kossa’s染色，堿性磷酸酶染色檢測(cè)成骨誘導(dǎo)的分化潛能。選擇其中較好的一種分離方法培養(yǎng)的BMSCs，用普通培養(yǎng)基和礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)基分別培養(yǎng)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)兩組BMSCs成骨相關(guān)基因表達(dá)量的變化。構(gòu)建攜帶人bFGF基因的慢病毒載體和GFP基因的慢病毒載體，收集GFP-慢病毒、bFGF-慢病毒上清轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)后第4代的羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSCs的轉(zhuǎn)染率。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染與非轉(zhuǎn)染的BMSCs成骨相關(guān)基因的表達(dá)量的變化。結(jié)果：全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)的BMSCs的CD44陽(yáng)性率為87.6%，密度梯度離心法的為83.4%，CD44陽(yáng)性率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后第3代BMSCs，Von Kossa’s法礦化結(jié)節(jié)染色和堿性磷酸酶染色為...

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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摘要
Abstract
前言
研究?jī)?nèi)容與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 羊的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)
        2.3 慢病毒載體構(gòu)建
        2.4 慢病毒感染羊 BMSC
    3 質(zhì)量控制
    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果
附技術(shù)路線圖
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間撰寫(xiě)和發(fā)表的論文
導(dǎo)師評(píng)閱表



本文編號(hào)：3916658