研究背景:牙齒的發(fā)育是一個(gè)上皮與間充質(zhì)相互作用的復(fù)雜的生物學(xué)過程,當(dāng)牙冠發(fā)育即將完成時(shí)牙根開始發(fā)育。牙根發(fā)育到一定程度開始萌出,從牙齒萌出到牙根發(fā)育完成,一般需要3-5年。這期間如果發(fā)生齲病或外傷,因不能得到及時(shí)治療,常引起牙髓病變甚至根尖周炎,導(dǎo)致牙齒發(fā)育停滯,處于該階段的年輕恒牙髓腔寬大、根管壁薄、根尖敞開使牙齒極易折裂,致使恒牙幼年早失,嚴(yán)重影響咀嚼功能及生活質(zhì)量。涉及前牙還會(huì)影響美觀。因此,探索促使牙根繼續(xù)發(fā)育的生物學(xué)治療方法-牙髓牙本質(zhì)再生,成為牙髓病學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。根尖乳頭干細(xì)胞（stem cells from apical papilla,SCAP）來源于恒牙根尖乳頭組織,可分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞,形成根部牙髓和牙本質(zhì)。因SCAP為發(fā)育階段的干細(xì)胞,與相同來源的牙髓干細(xì)胞相比,具有更強(qiáng)的增殖和分化潛能。在牙髓牙本質(zhì)的研究中,SCAP作為種子細(xì)胞越來越受到重視。然而其增殖分化的機(jī)制還不清楚。MicroRNA（miRNA）是一類內(nèi)源性、非編碼小分子單鏈RNA,與特定mRNA的3’端非編碼區(qū)（3’UTR）互補(bǔ)結(jié)合,抑制靶基因表達(dá)發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。miRNA在成骨細(xì)胞分化和骨組織... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＳＣＡＰ的組織來源及細(xì)胞培養(yǎng)??Ａ．包含根尖乳頭的第三恒磨牙：Ｂ．原代培養(yǎng)的細(xì)胞（４０＞〇?；?Ｃ．傳代培養(yǎng)的細(xì)胞（４〇ｘ）??

?第一部分人根尖乳頭干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定???２?ＳＣＡＰ的增殖??根據(jù)ＣＣＫ－８實(shí)驗(yàn)所測(cè)數(shù)據(jù)繪制得到ＳＣＡＰ的生長(zhǎng)曲線呈Ｓ型（圖２），表??現(xiàn)為三個(gè)不同的生長(zhǎng)期：生長(zhǎng)緩慢的潛伏期、斜率較大的指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。??接種后前２天，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，２天后增殖明顯加快，３－６天呈快速生長(zhǎng)的趨勢(shì)??進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期，此后細(xì)胞增殖變緩，進(jìn)入平臺(tái)期。結(jié)晶紫染色顯微鏡下觀察??到細(xì)胞呈克隆生長(zhǎng)，形態(tài)多為長(zhǎng)梭形。??Ａ?Ｂ??３１?ＯＤ?Ｖａｌｕｅｓ??ｉ２．?．?－：：??０－１?１?．?．?．?．?．?１??０?１?２?３?４?５?６?７??Ｄａｙｓ??圖２?ＳＣＡＰ的生長(zhǎng)曲線和克隆形成情況??Ａ．?ＳＣＡＰ的生長(zhǎng)曲線呈Ｓ型；Ｂ．細(xì)胞呈克隆生長(zhǎng)??３?ＳＣＡＰ表面分子表型的表達(dá)與特征??通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)與分析ＳＣＡＰ表面分子表型，顯示間充質(zhì)干細(xì)胞表面??標(biāo)記物ＳＴＲＯ－１和ＳＣＡＰ特異性表面標(biāo)記物ＣＤ２４呈陽性表達(dá)，陽性率分別為??３６．５％和２２．１％。而造血干細(xì)胞表面標(biāo)記物ＣＤ３４和ＣＤ４５的表達(dá)率為０．６％和??０．０４７％，被認(rèn)為呈陰性表達(dá)（圖３），表明所培養(yǎng)的ＳＣＡＰ具備間充質(zhì)干細(xì)胞的??特性，且在取材操作過程中沒有造血細(xì)胞的污染。??１３??

圖３流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ＳＣＡＰ的表面分子表型??４?ＳＣＡＰ多向分化能力鑒定??ＳＣＡＰ經(jīng)過成骨／成牙本質(zhì)向誘導(dǎo)培養(yǎng)７天后，ＡＬＰ染色顯示胞漿呈明顯的??藍(lán)紫色，對(duì)照組則未表現(xiàn)出特征性顏色變化（圖４Ａ，Ｄ）；誘導(dǎo)培養(yǎng)２１天后，??顯微鏡下見細(xì)胞呈復(fù)層生長(zhǎng)，在密集生長(zhǎng)的細(xì)胞層內(nèi)可見礦化結(jié)節(jié)，茜素紅染??色顯示大量的紅褐色結(jié)節(jié)或顆粒生成，對(duì)照組未見紅染的結(jié)節(jié)或顆粒（圖４Ｂ，Ｅ）；??成脂誘導(dǎo)２８天后，油紅０染色顯示大小不一的紅色脂滴形成，而對(duì)照組未見脂??滴形成（圖４Ｃ，Ｆ）。表明處于不同培養(yǎng)條件或微環(huán)境中的ＳＣＡＰ可以分化為不??同的細(xì)胞系。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-376b-3p可促進(jìn)Runx2誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞進(jìn)行成骨細(xì)胞早期分化[J]. 耿倩倩,余守和,張?jiān)?王紅梅,孫奮勇.  中國(guó)組織工程研究. 2013(28)



本文編號(hào)：3589734