目的研究A-PRF和i-PRF對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞（HGFs）增殖分化作用的機(jī)制,比較A-PRF和i-PRF生長(zhǎng)因子的釋放量（PDGF-BB、TGF-β1、EGF）以及A-PRF和i-PRF對(duì)HGFs增殖、遷移作用的影響。方法1.制備A-PRF及i-PRF均需抽取10ml靜脈全血,以1500r/min離心14分鐘得到A-PRF,以700r/min離心3分鐘得到i-PRF,待A-PRF、i-PRF中的生長(zhǎng)因子釋放一周后,收集富含生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)液并配制A-PRF、i-PRF條件培養(yǎng)基。2.采用組織塊貼壁法培養(yǎng)原代HGFs,選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定,通過(guò)鼠抗人波形蛋白染色及鼠抗人角蛋白染色進(jìn)行細(xì)胞來(lái)源鑒定。3.通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)A-PRF、i-PRF在1、3、7天生長(zhǎng)因子的釋放量（EGF、PDGF-BB、TGF-β1）;分別使用A-PRF、i-PRF條件培養(yǎng)基培養(yǎng)HGFs 7天,通過(guò)qRT-PCR方法檢測(cè)與軟組織愈合相關(guān)基因的表達(dá)（COL1a2、FN1、TGF-β、PDGF）;通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及DAPI免疫熒光染色法,探... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HGFs抗波形蛋白染色，×100

1 HGFs P0 代，×100 圖 1.2 HGFs P3 代，×100 圖 1.3 HGFs P3 代，F(xiàn)igure 1 HGFs ×1002 HGFs 的鑒定細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，且為長(zhǎng)梭形，從形態(tài)學(xué)上初步認(rèn)定為 HGFs；鼠抗人波形蛋白（Vimentin）染色陽(yáng)性，胞漿染為棕黃色，著色分布染為藍(lán)色（如圖 2.1 所示），鼠抗人角蛋白（cytokeratin）染色陰性被著色（如圖 2.2 所示），結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定，可判斷細(xì)胞來(lái)源于中驗(yàn)所需的 HGFs。

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 A-PRF/i-PRF 對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞增殖分化作用的機(jī)制研究4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果顯示，A-PRF 和 i-PRF 中均含有大量 EGF、PDGF-BB、TGF-β1，第 1 天到第 7 天的釋放量逐漸減少，第 7 天的釋放量仍然維持在一個(gè)較高水平，但 A-PRF 與 i-PRF 在 1、3、7 天生長(zhǎng)因子的釋放量存在一定差異(P＜0.05)（如圖 3 所示）。

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