目的：采用海藻酸鈣凝膠囊化山羊TMJ關(guān)節(jié)盤細胞,建立纖維軟骨細胞體外立體培養(yǎng)模型；研究評價不同的持續(xù)、間歇短期壓力對體外培養(yǎng)的山羊TMJ關(guān)節(jié)盤細胞外基質(zhì)中蛋白多糖和Ⅰ型膠原mRNA的表達影響。方法：1.取健康一月齡山羊雙側(cè)TMJ關(guān)節(jié)盤纖維軟骨組織,剪碎,0.2%Ⅰ型膠原酶消化過夜獲取關(guān)節(jié)盤纖維軟骨原代細胞,接種至培養(yǎng)瓶培養(yǎng),傳至P2代細胞。倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化及貼壁率,熒光顯微鏡下采集細胞生長圖像,培養(yǎng)細胞爬片,甲苯胺藍染色進行細胞鑒定。經(jīng)鑒定具備正常表型的P2代山羊TMJ關(guān)節(jié)盤纖維軟骨細胞,以5x105/ml密度接種到海藻酸鹽溶液中,形成纖維軟骨細胞-藻酸鈣凝膠復(fù)合體三維培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察凝膠小球內(nèi)細胞的生長情況；蕃紅O與Ⅰ型膠原免疫組化染色,觀察蛋白多糖、Ⅰ型膠原的分布。2.凝膠小球隨機分為七組,一組設(shè)為對照,其余六組經(jīng)不同持續(xù)、間歇壓力處理后,取一批凝膠球作鈣黃綠素—碘化丙啶的熒光染色進行凝膠球內(nèi)活、死細胞的測定；各組剩余的樣本通過解珠液將凝膠球溶解,重新獲取纖維軟骨細胞,通過實時熒光定量RT-PCR技術(shù)測定細胞外基質(zhì)中蛋白多糖和Ⅰ型膠原的mRNA的水平表達。結(jié)果... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
    1.1 TMJ關(guān)節(jié)盤的結(jié)構(gòu)和組成
    1.2 TMJ關(guān)節(jié)盤細胞、細胞基質(zhì)與力學(xué)特性的聯(lián)系
    1.3 TMJ關(guān)節(jié)盤纖維軟骨細胞力學(xué)的生物學(xué)反應(yīng)
    1.4 細胞海藻酸鈉凝膠復(fù)合三維培養(yǎng)的應(yīng)用
    1.5 熒光定量RT-PCR技術(shù)與應(yīng)用
    1.6 小結(jié)
實驗一 山羊TMJ關(guān)節(jié)盤細胞的獲取和藻酸鹽囊化關(guān)節(jié)盤細胞三維培養(yǎng)環(huán)境的建立
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
    2.3 實驗結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
實驗二 海藻酸鹽凝膠囊化關(guān)節(jié)盤細胞短期壓力下蛋白多糖和Ⅰ型膠原mRNA表達
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
    3.3 統(tǒng)計方法
    3.4 實驗結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 結(jié)論與展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
在學(xué)期間的研究成果
致謝
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞類型及分布表征在組織構(gòu)建中的設(shè)計意義[J]. 舒維娜,康宏,張衛(wèi)平,李欣,包廣潔.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(46)
[2]3種加載方式下正常人下頜骨三維有限元應(yīng)力分布分析[J]. 孫健,張富強,王冬梅,于嘉,王成燾.  上海口腔醫(yī)學(xué). 2004(01)

碩士論文
[1]動態(tài)和靜態(tài)壓力作用對山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞凝膠組織基質(zhì)代謝的影響[D]. 柯一凡.蘭州大學(xué) 2010



本文編號：3522734