背景:牙周炎是以牙周結(jié)締組織破壞和牙槽骨吸收為主要特征的一種常見的口腔慢性免疫炎癥性疾病,其患病率高達(dá)80%⁹0%,是我國(guó)成人喪失牙齒的主要原因之一。牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）作為牙周炎的主要致病菌,在其侵襲牙周組織后能夠誘導(dǎo)大量吞噬細(xì)胞聚集,引起炎癥反應(yīng)的發(fā)生,進(jìn)而導(dǎo)致牙周結(jié)締組織破壞和牙槽骨吸收。Pg菌定植牙周組織后釋放一種環(huán)二鳥苷酸（cyclic diguanylate,c-di-GMP）的物質(zhì),其通常存在于革蘭氏陰性菌中,充當(dāng)于細(xì)菌的第二信使,能夠?qū)⑹荏w信號(hào)從細(xì)胞表面轉(zhuǎn)移到真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中的一種靶分子。它是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)的一部分,能夠?qū)⒊跏夹盘?hào)擴(kuò)增數(shù)倍從而對(duì)細(xì)胞內(nèi)的生化反應(yīng)產(chǎn)生巨大作用。在牙周組織破壞的過(guò)程中,免疫炎癥反應(yīng)發(fā)揮著重要作用,作為機(jī)體固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分——巨噬細(xì)胞,勢(shì)必參與其中。在促炎或抗炎的微環(huán)境下,巨噬細(xì)胞可分化為兩種不同類型,即M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞,此過(guò)程稱為巨噬細(xì)胞極化。巨噬細(xì)胞的極化過(guò)程在對(duì)機(jī)體抵抗病原體感染及組織的修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此,推測(cè)c-di-... 

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【部分圖文】：

環(huán)二核苷酸在胞質(zhì)內(nèi)作用機(jī)制的模式圖

A、B：未經(jīng) c-di-GMP 刺激 (×40, ×100)；C、D：C-di-GMP 刺激細(xì)胞 24 小時(shí) (×40, ×100)。圖 1：C-di-GMP 刺激 RAW 264.7 細(xì)胞 24 小時(shí)后 RAW264.7 細(xì)胞形態(tài)變化Fig. 1: Variation of RAW264.7 cell morphology stimulated by c-di-GMP for 24 h.RAW264.7 細(xì)胞系與 50 μg/mL c-di-GMP 共同培養(yǎng) 24 小時(shí)后光學(xué)顯微鏡下觀察到陰性對(duì)照組(即 c-di-GMP 濃度為 0μg/mL)細(xì)胞形態(tài)以類圓形為主，伴有不規(guī)則多邊形，少量細(xì)胞有偽足（如圖 1A、B）；而受到 c-di-GMP 刺激的 RAW264.7細(xì)胞呈長(zhǎng)梭型，伸出大量偽足，且細(xì)胞鋪展面積明顯增大（如圖 1C、D）。3.2 實(shí)時(shí)定量 PCR 結(jié)果在 LPS 等外界微環(huán)境因素的改變下下，巨噬細(xì)胞可以發(fā)生活化，釋放大量的炎癥因子，介導(dǎo)炎癥的固有免疫應(yīng)答。而巨噬細(xì)胞的極化，即是巨噬細(xì)胞不同活化狀態(tài)的體現(xiàn)。為了探討 c-di-GMP 對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響，我們首先觀測(cè)c-di-GMP 對(duì)巨噬細(xì)胞刺激后牙周炎相關(guān)的炎癥因子表達(dá)的差異。將不同濃度(1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL)的 c-di-GMP 與 RAW 264.7

A~C：依次為 IL-1 β、IL-6 和 TNF-α 檢測(cè)結(jié)果；與對(duì)照組相比，*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001圖 2：不同濃度 c-di-GMP 刺激 RAW 264.7 細(xì)胞 24 h 后炎癥因子的基因表達(dá)情況Fig. 2: The inflammatory cytokines genes expression of different concentration c-di-GMPcocultured with RAW 264.7 for 24 h.為了進(jìn)一步明確 c-di-GMP 能促進(jìn)巨噬細(xì)胞發(fā)生 M1 型極化的猜想，我們采用相同的分組檢測(cè)了 M1 型巨噬細(xì)胞極化相關(guān)細(xì)胞因子 IL-23、iNOS 及 M2 型巨噬細(xì)胞極化相關(guān)細(xì)胞因子 IL-10 的 mRNA 表達(dá)水平的改變。M1 型巨噬細(xì)胞極化相關(guān)細(xì)胞因子 IL-23、iNOS 的 mRNA 表達(dá)水平與各組 c-di-GMP 濃度水平呈正相關(guān)，10μg/mL、50μg/mL 濃度組各基因的表達(dá)水平均明顯高于陰性對(duì)照組（如圖3A、B）。M2 型巨噬細(xì)胞極化相關(guān)細(xì)胞因子 IL-10 的 mRNA 表達(dá)水平在各濃度組中的表達(dá)水平無(wú)顯著升高，與陰性對(duì)照組相比表達(dá)量基本一致，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(如圖 3C)。


本文編號(hào)：3396219