目的:探討MicroRNA-214-3p（miR-214-3p）通過β-連環(huán)蛋白/TCF-4信號通路對于牙囊細(xì)胞（DFCs）成骨分化中的影響。方法:通過雙向差速傳代法體外分離,培養(yǎng)與提純牙囊細(xì)胞,通過向DFCs中轉(zhuǎn)染miR-214模擬物（mimics）及抑制物（inhibitor）以此上調(diào)及下調(diào)DFCSs中的miR-214的表達(dá)。經(jīng)成骨誘導(dǎo)7天后,通過qRT-PCR、茜素紅染色、免疫蛋白印跡證明miR-214及相關(guān)成骨基因的表達(dá)變化,以及β-連環(huán)蛋白（β-catenin）/TCF-4通路相關(guān)蛋白的變化。結(jié)果:RT-qPCR結(jié)果顯示:（1）DFCs成骨誘導(dǎo)后miR-214的表達(dá)下降。（2）使用Lipo3000將miR-214mimics與inhibitor轉(zhuǎn)染進(jìn)入DFCs可以相應(yīng)上調(diào)及下調(diào)DFCs中miR-214的表達(dá)。（3）miR-214上調(diào)可使DFCs在成骨誘導(dǎo)過程中的成骨相關(guān)基因ALP（P<0.01）,OSN（P>0.05）,RUNX-2（P>0.05）的mRNA下調(diào),miR-214下調(diào)可使DFCs在成骨誘導(dǎo)過程中的成骨相關(guān)基因ALP,OSN,RUNX-2的mRN... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代DFCs（×50倍）

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文17注：*：p＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；**:p＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義圖3轉(zhuǎn)染miR214mimics及miR214inhibitor后1、2、3dmiR214表達(dá)情況Fig.3ExpressionofmiR2141,2and3daysaftertransfectionofthemiR214mimicsandmiR214inhibitor3成骨誘導(dǎo)后DFCs表達(dá)miR-214的相關(guān)檢測取成骨誘導(dǎo)7天后的DFCs作為實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行成骨誘導(dǎo)后miR-214表達(dá)的檢測。與正常的DFCs相比，其miR-214的表達(dá)低于正常DFCs（P＜0.05）。注：*：p＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；圖4成骨誘導(dǎo)7天后DFCs中miR-214的表達(dá)Fig.4ExpressionofmicroRNA-214after7daysofosteoinduction

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文184轉(zhuǎn)染后DFCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)后的miR-214的表達(dá)取轉(zhuǎn)染miR-214inhibitor、miR-214mimics及未行轉(zhuǎn)染的DFCs（NC組），均進(jìn)行成骨誘導(dǎo)7天的DFCs進(jìn)行成骨誘導(dǎo)后miR-214的檢測，可見轉(zhuǎn)染后7天miR-214mimics組中miR-214的表達(dá)依舊較NC組高24倍，而miR-214inhibitor組經(jīng)7天的成骨誘導(dǎo)后其表達(dá)miR-214依舊低于NC組。說明轉(zhuǎn)染效果依然存在。注：*：p＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；**:p＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義圖5轉(zhuǎn)染miR-214mimics及miR-214inhibitor并成骨誘導(dǎo)7天后miR-214的表達(dá)情況Fig.5ExpressionofmicroRNA-214after7daysofosteoinductionaftertransfectionofmicroRNA-214mimicsandmicroRNA-214inhibitor5成骨相關(guān)基因mRNA表達(dá)的檢測取轉(zhuǎn)染miR-214inhibitor、miR-214mimics及正常DFCs組（NC組），均進(jìn)行成骨誘導(dǎo)7天的DFCs進(jìn)行成骨誘導(dǎo)后成骨相關(guān)基因（ALP,OCN,RUNX-2）的檢測，可見miR-214mimics轉(zhuǎn)染后，其成骨相關(guān)基因的表達(dá)均低于NC組但OSN及RUNX-2（p＞0.05）無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而miR-214inhibitor轉(zhuǎn)染后，其成骨相關(guān)基因OCN及RUNX-2的表達(dá)遠(yuǎn)高于NC組,但ALP上調(diào)不明顯。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]干擾UCA1及抑制miR-185-5p對非小細(xì)胞肺癌β-Catenin通路的活化、自噬和存活影響[J]. 楊雁,劉行仁,金釗.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2019(02)
[2]miR對骨質(zhì)疏松骨代謝信號通路影響的研究進(jìn)展[J]. 宋敏,鞏彥龍,劉濤,董萬濤,李清林,孫定平,周靈通.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2016(09)
[3]無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A/受體酪氨酸激酶樣孤兒受體2在大鼠牙囊細(xì)胞中的表達(dá)及其意義[J]. 王麗萍,李伯琦,王琪,鐵曉敏,劉奕杉.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2016(04)
[4]雙向差速法純化大鼠牙囊細(xì)胞[J]. 王麗萍,李伯琦,鐵曉敏,王琪,劉奕杉.  口腔疾病防治. 2016(03)



本文編號：3367859