齲病是危害人類健康最常見的口腔疾病之一，其發(fā)生與牙菌斑生物膜密切相關(guān)。變形鏈球菌（Streptococcus mutans，S．mutans）（以下簡稱變鏈菌）是齲病的主要致病菌，也是牙菌斑生物膜中重要的定植菌，變鏈菌對(duì)牙面的粘附是其定植、致齲的基礎(chǔ)。變鏈菌的粘附經(jīng)過初始粘附（非蔗糖依賴性粘附）和蔗糖依賴性粘附兩個(gè)階段最后形成牙菌斑生物膜，是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜過程。以往研究發(fā)現(xiàn)變鏈菌不同菌株的致齲毒力存在很大差異，推測此差異的物質(zhì)基礎(chǔ)是致齲毒力因子基因的變異。因此變鏈菌致齲毒力因子基因多態(tài)性成為研究的熱點(diǎn)，與粘附相關(guān)的各毒力因子基因多態(tài)性及其與變鏈菌致齲毒力的關(guān)系可見報(bào)道。然而，也有證據(jù)顯示，致齲毒力因子基因表達(dá)的量似乎比基因多態(tài)性更能影響變鏈菌毒力。近年來，關(guān)于變鏈菌基因表達(dá)調(diào)控的研究受到越來越多學(xué)者的關(guān)注。本研究通過測定不同培養(yǎng)條件下變鏈菌粘附能力的改變及其粘附相關(guān)基因表達(dá)的變化，了解變鏈菌粘附相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控與粘附毒力的相關(guān)關(guān)系。方法：采用放射性同位素標(biāo)記細(xì)菌，定量檢測不同培養(yǎng)條件下變鏈菌初始粘附及蔗糖依賴性粘附能力的變化。同時(shí)構(gòu)建變鏈菌基因表達(dá)譜檢測芯片，利用基因芯片技術(shù)篩選... 

【文章來源】：四川大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【圖文】：

變鏈菌總RNA的1%瓊脂糖凝膠電泳圖

本實(shí)驗(yàn)中目的基因及內(nèi)參基因在各組樣品中均能被特異性擴(kuò)增，凝膠電泳顯示各基因在各實(shí)驗(yàn)組中的CDNA產(chǎn)物均為單一條帶，產(chǎn)物與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)吻合(見圖5)。圖5目的基因及內(nèi)參基因產(chǎn)物電泳圖 Fig.5EleetroPhorasisofProductsoftargetgenes and16SrRNAgene注:1、2號(hào)泳道內(nèi)為spaP基因擴(kuò)增產(chǎn)物4、5號(hào)泳道內(nèi)為srtA基因擴(kuò)增產(chǎn)物7、8號(hào)泳道內(nèi)為16SrRNA基因擴(kuò)增產(chǎn)物2.3目的基因及內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線取一樣品CDNA連續(xù)稀釋為10一4至10一7倍作為標(biāo)準(zhǔn)模板，實(shí)時(shí)熒光定量!〕CR擴(kuò)增sPa尸基因、sI’胡基因及內(nèi)參基因，得到Ct值和相應(yīng)模板拷貝數(shù)，分別得到目的基因及內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖6所示。目的基因印a尸、二胡和內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸系數(shù)均大于0.96，三者

圖6sPaP基因、‘刊月基因及內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.6StandardcurvesofsPaP，sr叼and165rRNAgenesA圖樣品cDNAsPaP基因標(biāo)準(zhǔn)曲線B圖樣品cDNA:rtA基因標(biāo)準(zhǔn)曲線C圖樣品cDNA內(nèi)參基因標(biāo)準(zhǔn)曲線2.4不同濃度葡萄糖條件下變鏈菌sPaP基因、s以基因及內(nèi)參基變鏈菌臨床株及參考株UA159在pH7.O的0.2、1、5%葡萄糖下，其基因的表達(dá)情況見表8、9，圖7、8。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表10菌臨床株4801和參考株UA159在不同葡萄糖條件下目的基因及內(nèi)參曲線分別如圖9、10所示。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]變形鏈球菌F-ATP酶亞基基因uncA遺傳多態(tài)性的研究[J]. 楊德琴,劉天佳,莊姮,亓慶國,李頌,劉建國.  中華口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2006(01)
[2]AP-PCR基因指紋用于變形鏈球菌傳播株與非傳播株的篩選[J]. 李頌,劉天佳,莊姮,楊錦波,楊德琴,劉昭慧.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2003(05)
[3]變形鏈球菌葡糖基轉(zhuǎn)移酶遺傳多態(tài)性與齲病發(fā)生關(guān)系的研究[J]. 陳舟,劉天佳,楊錦波,莊姮,黃曉晶.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2002(06)
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[5]高齲及無齲者變形鏈球菌臨床分離株致齲性研究 Ⅰ對(duì)唾液包被羥磷灰石的粘附實(shí)驗(yàn)[J]. 黃曉晶,劉天佳,陳舟,詹玲,楊錦波.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2000(06)

博士論文
[1]變形鏈球菌糖代謝相關(guān)基因的差異性表達(dá)與其致齲性關(guān)系的研究[D]. 陸玉.四川大學(xué) 2006
[2]變形鏈球菌產(chǎn)酸相關(guān)基因表達(dá)水平及其與致齲性關(guān)系的研究[D]. 皮根莉.四川大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3354333