實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)旨研究Hippo/YAP信號(hào)通路介導(dǎo)人永生化人牙周膜干細(xì)胞系建立及機(jī)制。通過(guò)過(guò)表達(dá)TERT基因的慢病毒轉(zhuǎn)染人牙周膜干細(xì)胞,建立永生化人牙周膜干細(xì)胞系。通過(guò)檢測(cè)過(guò)表達(dá)TERT基因后的牙周膜干細(xì)胞Hippo/YAP信號(hào)通路中YAP/TAZ蛋白表達(dá)水平是否改變,并在此基礎(chǔ)上加入YAP抑制劑維替泊芬,以此揭示Hippo/YAP信號(hào)通路介導(dǎo)人永生化人牙周膜干細(xì)胞系建立及作用機(jī)制,進(jìn)一步深入認(rèn)識(shí)永生化人牙周膜干細(xì)胞系建立的調(diào)控機(jī)制,為牙周膜干細(xì)胞用于牙周組織修復(fù)再生、治療牙周疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法1.使用酶消化組織塊法分離獲得原代人牙周膜干細(xì)胞;使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定干細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)水平;檢測(cè)所得細(xì)胞成骨、成脂及成軟骨分化能力。2.過(guò)表達(dá)TERT基因的慢病毒轉(zhuǎn)染人牙周膜干細(xì)胞;EdU染色法和CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖;流式細(xì)胞術(shù)和Tunel染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;β-半乳糖苷酶染色法檢測(cè)細(xì)胞衰老;成骨誘導(dǎo)液礦化誘導(dǎo)檢測(cè)成骨分化能力;裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的成瘤性。3.Western Blot和實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR檢測(cè)增殖、凋亡、衰老及成骨基因的表達(dá)。使用維替泊芬抑制劑后再次檢... 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ｈＰＤＬＳＣｓ原代培養(yǎng)??

Ｈ??圖ｌ－２ｈＰＤＬＳＣｓ?（Ｐ４）傳代培養(yǎng)??２．?２ｈＰＤＬＳＣｓ干細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)??流式分析結(jié)果如圖１－３。ｈＰＤＬＳＣｓ表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞特異性的陽(yáng)性標(biāo)志，包??括?ＣＤ９０?（９９．?７±０．?３０％）、ＣＤ４４（９９．?２±０．?１２％）、ＣＤ１０５?（９９．?２±０＿?１７％）、ＣＤ７３（９９．?８??±０．?２７％），低表達(dá)造血及上皮細(xì)胞特異性的陽(yáng)性標(biāo)志ＣＤ３４、ＣＤｌｌｂ、ＣＤ１９、ＣＤ４５、??ＨＬＡ－ＤＲ?（ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｃｋｔａｉｌ，?４．?３７±０＿?０３％）。（圖?１－３）。??＇＊１?Ａ?Ａ?Ａ?＊?ＣＯＭ＜Ｏｉｉ？？ＣＤｌＳ＞ＣＯｔｉ＞？ｌ＞Ｏｆ＜??Ｍ７？?５?卜＂??．１?ｊ?ｖ?．Ｉ?，．?！?＼?ｉａ／?ｖ．?ｊ?ｖｙ?Ｉ?ｉ?＼ｉ?．?．?｜??，ｏ０?１？’?ｔｏ＊?，〇＊?？ｏ４?１０°?’〇?？〇＊?？〇Ｊ?ｔｏ４?１０＊?，�！�?，ｏ７?１０’?Ｉ０４?１０°?１０＊?，０＊?１０＊?（〇４?ｔｐ１?，〇＊?ｔ〇４??ｈ？ｍ?＊ｉｉ?ｈ?ｎ．４Ｈ??圖１－３ｈＰＤＬＳＣｓ?（Ｐ４）的干細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)??２．?３?ｈＰＤＬＳＣｓ多向分化檢測(cè)??成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色結(jié)果顯示有染為紅色的礦化結(jié)節(jié)（圖１－４，?Ａ）。成脂??誘導(dǎo)后油紅〇染色結(jié)果顯示有染為紅色的脂滴（圖１－３，?Ｂ）。成軟骨誘導(dǎo)后Ａｌｃｉａｎ??ｂｌｕｅ染色結(jié)果顯示蛋白聚糖沉積（圖１－４

■ｍｉ?０Ｕ＿＿Ｕ＿Ｉ＿Ｉ＿＾Ｂ＿??圖２－２ＴＥＲＴ－ｈＰＤＬＳＣｓ?ＴＥＲＴ基因表達(dá)情況??＊Ｐ＜０．?０５?＊＊Ｐ＜０．?０１??２．?３ＴＥＲＴ－ｈＰＤＬＳＣｓ干細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測(cè)??流式分析結(jié)果如圖２－３。ｈＰＤＬＳＣｓ表達(dá)間充質(zhì)千細(xì)胞特異性陽(yáng)性標(biāo)志，包括??ＣＤ９０?（９９．?４±０．?２７％）、ＣＤ４４?（９８．?５±０．?２２％）、ＣＤ１０５?（９０．?４±０．?１５％）、ＣＤ７３?（９９．?１??土０．２３％），低表達(dá)造血及上皮細(xì)胞特異性陽(yáng)性標(biāo)志ＣＤ３４、ＣＤｌｌｂ、ＣＤ１９、ＣＤ４５??和?ＨＬＡ－ＤＲ?（ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｃｋｔａｉｌ，?０．４１５±０．?０３％）。（圖?２－３）。??．?ｒ￣?！?Ｉ?ＣＯＭ＊Ｃ〇ｉ?０？??Ｊ?＇ｉ?Ｉ?＼?ｌ?＼?ｌｉ?ｉ?＇?ｉ＼?ｉ?Ｉ?！?＼ｌ?＼＼??．ＯＪ?ｉＵＵ?．ｕＡＪ?．ＬｉＪ?．ｌｉ＿Ｊ??１０？?ｔ〇’?１０＊?Ｍ＊?Ｉ＊４?１０?１０?１＃?１９?？〇?１８？?Ｉ＃＇?？０＊?ｉ？＊?？＃４?１０？?１〇＇?１０＊?１０＊?Ｍ＊?？０°?？？?ｉ〇＊?ｌ〇Ｊ?ｌ〇＊??ｎ．１?ｍ?ｒｕｎ?Ｈ４－？?＊ｉｉｍ??圖２－３ＴＥＲＴ－ｈＰＤＬＳＣｓ干細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測(cè)??２．?４轉(zhuǎn)染后細(xì)胞生物學(xué)行為的改變??２．４．?１細(xì)胞增殖的改變??ＣＣＫ－８結(jié)果為：第３天時(shí)對(duì)照組０Ｄ值為１．０３土０．?１１５，實(shí)驗(yàn)組（０ＥＴＥＲＴＰ１??和?０Ｅ?ＴＥＲＴ?Ｐ３０）?０Ｄ值分別為?０．８７土０．２１１?與?０．８３±０．２０４?（／？＜０．０５）；第４天??時(shí)對(duì)照組０Ｄ值為０？?５２±０．?１０７


本文編號(hào)：3346700