轉(zhuǎn)化生長因子β1基因體外轉(zhuǎn)染兔顳下頜關(guān)節(jié)滑膜間充質(zhì)干細胞向纖維軟骨轉(zhuǎn)化實驗研究
發(fā)布時間：2021-07-23 17:28
第一部分攜帶TGF-β1基因重組腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建目的構(gòu)建攜帶TGF-β1基因的重組腺相關(guān)病毒載體,制備表達TGF-β1基因的重組腺相關(guān)病毒rAAV-TGF-β1,檢測重組病毒的滴度,為TGF-β1基因的真核表達及臨床應用提供實驗基礎。方法含TGF-β1 cDNA的質(zhì)粒pcDNA3-TGF-β1和質(zhì)粒pAAV-MCS用EcoRⅠ+XbaⅠ進行雙酶切后連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞,獲得重組質(zhì)粒pAAV-MCS-TGF-β1。通過酶切和DNA測序鑒定重組質(zhì)粒的正確性。采用磷酸鈣共沉淀法,以重組質(zhì)粒pAAV-MCS-TGF-β1和pAAV-RC、pHelper共轉(zhuǎn)染AAV-293細胞,產(chǎn)生具有感染性的病毒顆粒rAAV-TGF-β1并檢測重組病毒的滴度。結(jié)果成功構(gòu)建攜帶目的基因TGF-β1的重組質(zhì)粒pAAV-MCS-TGF-β1,并獲得攜帶TGF-β1基因的重組腺相關(guān)病毒rAAV-TGF-β1。重組質(zhì)粒pAAV-MCS—TGF-β1經(jīng)雙酶切和測序證實TGF-β1基因正確插入載體且序列正確。重組腺相關(guān)病毒rAAV-TGF-β1經(jīng)PCR檢測,可見1.2kb大小的TGF-β1基因片段。重組...
【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：116 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
pcDNA3質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖
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【參考文獻】：
期刊論文
[1]顳下頜關(guān)節(jié)滑膜間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng)[J]. 李健,龍星,柯金,孟慶功,房維. 中華口腔醫(yī)學雜志. 2005(05)
[2]兔骨髓干細胞向軟骨細胞分化用于半月板組織工程重建[J]. 徐青鐳,吳海山,周維江,萬年宇. 中國臨床康復. 2003(06)
[3]TGF-β1基因修飾的間充質(zhì)干細胞/仿生基質(zhì)材料復合移植修復兔關(guān)節(jié)軟骨缺損[J]. 郭曉東,杜靖遠,鄭啟新,劉勇,段德宇,全大萍,盧澤儉. 中國生物醫(yī)學工程學報. 2002(02)
[4]TGF-β1在不同發(fā)育階段胎兒髁突軟骨中的表達[J]. 王健,陳新明,汪說之. 口腔醫(yī)學縱橫. 2001(04)
[5]bFGF、IGF-Ⅰ及TGF-β1對人髁突軟骨細胞增殖的影響[J]. 焦巖濤,王大章,韓文利,胡靜. 中華口腔醫(yī)學雜志. 2000(05)
[6]功能矯形大鼠下頜前伸后髁突胰島素分布規(guī)律的研究[J]. 賴文莉,趙美英,羅頌椒. 中華口腔醫(yī)學雜志. 1996(02)
本文編號：3299724
【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
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【學位級別】：博士
【部分圖文】：
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協(xié)’獷·’沙，:甘導‘尸;黔一洲A下C召八TTG戶戶TTCCCeGGGG八TCCTCT戶G六6TC6ACC16CAG八戶6C丫了GCC了C好八6C八已CGCTGC下CG八G戍GATCr圖1一 2pAAV一Mcs質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖2.2質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化①將1伽 1pcDNA3一TeF一Bi和i伽 1pAAV一Mes質(zhì)粒溶液分別與10助 1DH5a百coli感受態(tài)細菌懸液混合于 1.5mlEp管中，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，冰浴30~40min。②42℃水浴2分鐘，使菌體短暫熱休克，提高轉(zhuǎn)化效率。③37oC水浴smin。④用接種環(huán)蘸取少許菌液在LB膩節(jié)青霉素(10伽留角1)抗性平板上劃線，37℃培養(yǎng)過夜。異腳呼經(jīng)r八叫館“3牡rV襄V日Sc酬注恤妙do的。t“妞叩戶呼州夢d梅on旗價p.切川np洛招零圖1一3質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
協(xié)’獷·’沙，:甘導‘尸;黔一洲A下C召八TTG戶戶TTCCCeGGGG八TCCTCT戶G六6TC6ACC16CAG八戶6C丫了GCC了C好八6C八已CGCTGC下CG八G戍GATCr圖1一 2pAAV一Mcs質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖2.2質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化①將1伽 1pcDNA3一TeF一Bi和i伽 1pAAV一Mes質(zhì)粒溶液分別與10助 1DH5a百coli感受態(tài)細菌懸液混合于 1.5mlEp管中，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，冰浴30~40min。②42℃水浴2分鐘，使菌體短暫熱休克，提高轉(zhuǎn)化效率。③37oC水浴smin。④用接種環(huán)蘸取少許菌液在LB膩節(jié)青霉素(10伽留角1)抗性平板上劃線，37℃培養(yǎng)過夜。異腳呼經(jīng)r八叫館“3牡rV襄V日Sc酬注恤妙do的。t“妞叩戶呼州夢d梅on旗價p.切川np洛招零圖1一3質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
【參考文獻】：
期刊論文
[1]顳下頜關(guān)節(jié)滑膜間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng)[J]. 李健,龍星,柯金,孟慶功,房維. 中華口腔醫(yī)學雜志. 2005(05)
[2]兔骨髓干細胞向軟骨細胞分化用于半月板組織工程重建[J]. 徐青鐳,吳海山,周維江,萬年宇. 中國臨床康復. 2003(06)
[3]TGF-β1基因修飾的間充質(zhì)干細胞/仿生基質(zhì)材料復合移植修復兔關(guān)節(jié)軟骨缺損[J]. 郭曉東,杜靖遠,鄭啟新,劉勇,段德宇,全大萍,盧澤儉. 中國生物醫(yī)學工程學報. 2002(02)
[4]TGF-β1在不同發(fā)育階段胎兒髁突軟骨中的表達[J]. 王健,陳新明,汪說之. 口腔醫(yī)學縱橫. 2001(04)
[5]bFGF、IGF-Ⅰ及TGF-β1對人髁突軟骨細胞增殖的影響[J]. 焦巖濤,王大章,韓文利,胡靜. 中華口腔醫(yī)學雜志. 2000(05)
[6]功能矯形大鼠下頜前伸后髁突胰島素分布規(guī)律的研究[J]. 賴文莉,趙美英,羅頌椒. 中華口腔醫(yī)學雜志. 1996(02)
本文編號：3299724
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