牙周病造成牙周附著結構喪失,牙槽骨吸收,是成年人失牙的主要原因,嚴重影響患者身心健康。因此,牙周附著組織的再生是牙周病治療的主要目標。目前引導牙周組織再生術（guide tissue regeneration, GTR）取得了較好的效果。它是將一種屏障性材料放于牙根和牙齦瓣之間,阻擋牙齦成纖維細胞和上皮細胞長入,從而使具有再生潛能的牙周韌帶細胞（periodontal ligament cells, PDLCs）優(yōu)先占據(jù)根面空間,依靠其分化形成牙周組織。這種技術從臨床上和動物實驗中均證實能夠形成牙周新附著。然而長期的牙周病損使剩余的牙周韌帶細胞數(shù)量減少,不能滿足完全的修復再生。因此,我們需要補充一定量的種子細胞到牙周缺損區(qū)以彌補自身細胞數(shù)量的不足。在本課題中,我們將攜帶增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）基因的大鼠成骨細胞,接種至三維多孔支架殼聚糖/納米羥基磷灰石（chito san/hydroxyapatite, CS/nHA）膜上,植入大鼠顱頂骨缺損,觀察其是否既具有屏障膜功能又能提供細胞來源,為負載種子細胞的殼聚糖... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

AIP染色觀察到成，丹細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)紅色的沉淀(I勺箭頭示)(x400)

山東大學碩十學位淪文組不植入任何材料。用無菌生理鹽水沖洗術區(qū)，縫合傷口(圖7a，7b)。圖7a人鼠顱胃，標準骨缺損模型的制備:圖7b骨缺損區(qū)植入細胞與CS/nHA復合膜)月慢速球鉆磨顱骨至直徑smm的臨界謂·缺損2.3取材與檢測:2.3.1標本處理:術后16周，將實驗組大鼠麻醉，4%多聚甲醛溶液灌注完成內(nèi)固定。取初步固定的大鼠新鮮顱骨標本，置于4%的多聚甲醛溶液固定24h。修整、切開骨缺損。分別制作石蠟切片和冰凍切片。石蠟切片制作 :0.5MEDTA脫鈣液振蕩脫鈣6周(每2天更換一次脫鈣液)，直到脫鈣完成。流水充分沖洗后，標本用各級酒精逐級脫水:50%乙醇脫水1小時~70%乙醇2小時一80%乙醇過夜一95%乙醇I脫水lh一95%乙醇111小時一 100%乙醇11小時一 100%乙醇 11lh，取出晾干一二甲苯透明11小時一二甲苯透明H50分鐘一浸蠟、包埋，用刀片修整標本周圍多余的石蠟以便切片

圖7a人鼠顱胃，標準骨缺損模型的制備:圖7b骨缺損區(qū)植入細胞與CS/nHA復合膜)月慢速球鉆磨顱骨至直徑smm的臨界謂·缺損2.3取材與檢測:2.3.1標本處理:術后16周，將實驗組大鼠麻醉，4%多聚甲醛溶液灌注完成內(nèi)固定。取初固定的大鼠新鮮顱骨標本，置于4%的多聚甲醛溶液固定24h。修整、切開骨損。分別制作石蠟切片和冰凍切片。石蠟切片制作:0.5MEDTA脫鈣液振蕩鈣6周(每2天更換一次脫鈣液)，直到脫鈣完成。流水充分沖洗后，標本用級酒精逐級脫水:50%乙醇脫水1小時~70%乙醇2小時一80%乙醇過夜一95乙醇I脫水lh一95%乙醇111小時一100%乙醇11小時一100%乙醇11lh，取晾干一二甲苯透明11小時一二甲苯透明H50分鐘一浸蠟、包埋，用刀片修整

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞活體示蹤標記方法的研究現(xiàn)狀[J]. 馬云霞,宋京翔,涂小煌.  醫(yī)學綜述. 2010(13)
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碩士論文
[1]組織化學染色方法在生長板組織學研究中的應用[D]. 劉曉娟.河北醫(yī)科大學 2007
[2]大鼠脂肪干細胞誘導為成骨細胞三維立體培養(yǎng)的實驗研究[D]. 單秀莉.山東大學 2006
[3]納米羥基磷灰石/殼聚糖復合BMP再血管化的初步實驗研究[D]. 彭超.四川大學 2006



本文編號：3291258