目的:用H₂O₂處理作為氧化應(yīng)激刺激因素來誘導(dǎo)hPDLCs衰老,觀察Met對hPDLCS衰老的作用,初步探索其作用機制。同時觀察在H₂O₂和Met的作用下,hPDLCs成骨分化能力的變化。方法:1 hPDLCs的分離培養(yǎng)和鑒定:I型膠原酶消化人牙周膜,組織塊貼壁法進行hPDLCs的原代培養(yǎng);倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),成軟骨、成骨、成脂誘導(dǎo)后阿利新藍、茜素紅、油紅O染色鑒定其多向分化能力,流式細胞術(shù)檢測干細胞表面標志物（CD34、CD73、CD146和Stro-1）;取第3代hPDLCs用于后續(xù)實驗。2 H₂O₂誘導(dǎo)hPDLCs衰老:用不同濃度的H₂O₂（50μM,100μM,200μM,300μM,500μM）處理hPDLCs,用CCK-8試劑盒檢測細胞在0、1、3、5、7天的活性,用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡,篩選明顯抑制hPDLCs活性但不顯著促進其凋亡的最適H₂O₂濃... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

hPDLCs形態(tài)學觀察A:第5天，hPDLCs在組織塊周圍呈放射狀生長；B:第3代X40X40

1-1 hPDLCs 形態(tài)學觀察 A:第 5 天，hPDLCs 在組織塊周圍呈放射狀生長；B:第 3 代hPDLCs 呈長梭形。.1-1 The morphological observation of hPDLCsA: hPDLCs grow radically around theissue block on the fifth day; B: hPDLCs at passage 3 show long spindle morphology.人牙周膜細胞多向分化能力的鑒定PDLCs 在成軟骨誘導(dǎo) 14 天后，用阿利新藍染色，結(jié)果顯示:hPDLCs 出現(xiàn) 1-2A）。hPDLCs 在成骨誘導(dǎo) 21 天后，用茜素紅染色，結(jié)果顯示：hPDL紅染的礦化結(jié)節(jié)（圖 1-2B）。hPDLCs 在成脂誘導(dǎo) 14 天后，hPDLCs 形態(tài)，有白色脂滴形成（圖 1-2C），油紅 O 染色陽性（圖 1-2D）。40 X40

染色; C: 成脂誘導(dǎo)后白色脂滴形成；D 油紅 O 染色。Identification of multipotential differentiation of hPDLCsA:Alcian blue stains induced by chondrogenic induction medium; B:Alizarin Red staining of hPD by osteogenic induction medium; C: Formation of white fat droplets; D: Oil rstaining of hPDLCs induced by adipogenic induction medium.周膜細胞分子表型鑒定周膜細胞細胞第 4 代，經(jīng)流式細胞術(shù)鑒定結(jié)果如下：間充質(zhì)干細胞原表達（圖 1-3A、B、C）：CD73：98.58%；CD146：85.89%；St血系細胞表面抗原表達(圖 1-3D)：CD34：0.13%。說明細胞為間充髓來源，并且具有干細胞特性。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]三種方法原代培養(yǎng)人牙周膜細胞[J]. 蔣俊強,王忠朝,黎春暉,蔡煒.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(23)
[2]人牙周膜細胞原代培養(yǎng)及鑒定[J]. 李雋,胥春,郝軼,張富強.  上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2008(11)
[3]改良組織塊法體外培養(yǎng)人牙周膜細胞和牙髓細胞[J]. 江龍,朱亞琴.  牙體牙髓牙周病學雜志. 2008(04)



本文編號：3226605