目的:探討直接接觸共培養(yǎng)法和Transwell間接接觸共培養(yǎng)法誘導(dǎo)山羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Goat bone marrow mesenchymal stem cells,gBMSCs）向山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞（Temporomandibular joint disc cells,TMJ disc cells）中成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞分化的可行性及共培養(yǎng)最佳比例,為顳下頜關(guān)節(jié)盤組織工程的種子細(xì)胞來源提供理論依據(jù)。方法:1.BMSCs的提取培養(yǎng)和鑒定——提取培養(yǎng)原代BMSCs并傳代;流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面標(biāo)志物;10μg/L bFGF的成纖維軟骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)的BMSCs;甲苯胺藍(lán)染色、天狼猩紅染色、番紅O染色、Ⅰ型膠原免疫組織化學(xué)染色分別檢測生長因子誘導(dǎo)后的BMSCs成纖維細(xì)胞樣分化的潛能。2.TMJ disc cells的原代、傳代培養(yǎng)并鑒定其特異性——提取并培養(yǎng)原代山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞;CCK8法檢測細(xì)胞的增殖活性;甲苯胺藍(lán)和天狼猩紅染色鑒定TMJ disc cells;免疫組織化學(xué)染色檢測Ⅰ、Ⅱ型膠原的分布;Elisa試劑盒檢測糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）表達(dá)水平... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定和誘導(dǎo)
    1.1 引言
    1.2 實驗方法
        1.2.1 山羊BMSCs的分離培養(yǎng)
        1.2.2 BMSCs表面標(biāo)記檢測
        1.2.3 BMSCs成纖維軟骨誘導(dǎo)
        1.2.4 BMSCs的凍存與復(fù)蘇
            1.2.4.1 BMSCs凍存
            1.2.4.2 BMSCs復(fù)蘇
    1.3 實驗結(jié)果
        1.3.1 原代BMSCs的形態(tài)學(xué)觀察
        1.3.2 BMSCs誘導(dǎo)后倒置顯微鏡觀察
        1.3.3 BMSCs表面標(biāo)志物檢測
        1.3.4 BMSCs誘導(dǎo)后組織學(xué)染色結(jié)果
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
第二章 顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.1 引言
    2.2 實驗方法
        2.2.1 山羊TMJ disc cells的分離培養(yǎng)
        2.2.2 山羊TMJ disc cells的復(fù)蘇與凍存
        2.2.3 山羊 TMJ disc cells 的形態(tài)學(xué)染色
        2.2.4 CCK8 法檢測山羊 TMJ disc cells 的增殖活性
        2.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析統(tǒng)計學(xué)處理
    2.3 實驗結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 直接和間接Transwell共培養(yǎng)體系下誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞分化的研究
    3.1 引言
    3.2 實驗方法
        3.2.1 BMSCs和顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞直接共培養(yǎng)法
        3.2.2 BMSCs和顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞Transwell共培養(yǎng)法
        3.2.3 細(xì)胞增值能力分析
        3.2.4 測定指標(biāo)
        3.2.5 GAG的定量檢測
        3.2.6 實時熒光定量PCRⅠ型、Ⅱ型膠原基因表達(dá)分析
        3.2.7 WB檢測Ⅰ、Ⅱ型膠原
        3.2.8 統(tǒng)計學(xué)處理
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 CCK8 法檢測共培養(yǎng)細(xì)胞的增殖活性
        3.3.2 Ⅰ型膠原的定性檢測
        3.3.3 GAG定性檢測
        3.3.4 Ⅱ型膠原定性檢測
        3.3.5 GAG定量檢測
        3.3.6 Ⅰ型膠原和Ⅱ型膠原基因表達(dá)的定量分析
        3.3.7 Ⅰ型膠原和Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)量檢測
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
全文總結(jié)
    1 本文的主要小結(jié)
    2 本文的創(chuàng)新之處
    3 尚需完善及進(jìn)一步研究之處
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
在學(xué)期間成果
致謝
臨床病例左上后牙牛牙癥RCT一例


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Supportive angiogenic and osteogenic differentiation of mesenchymal stromal cells and endothelial cells in monolayer and co-cultures[J]. Florian B?hrnsen,Henning Schliephake.  International Journal of Oral Science. 2016(04)
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[3]山羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向纖維軟骨分化的形態(tài)學(xué)改變[J]. 蘇雪蓮,包廣潔,康宏,劉琳,孔楠楠.  中國組織工程研究. 2014(06)
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碩士論文
[1]靜電紡纖維負(fù)載共培養(yǎng)細(xì)胞膜片構(gòu)建組織工程關(guān)節(jié)盤的實驗研究[D]. 王春暉.吉林大學(xué) 2016
[2]干細(xì)胞源性纖維軟骨自組裝基體的構(gòu)建及力學(xué)性能研究[D]. 呂瑋.蘭州大學(xué) 2016
[3]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)山羊TMJ關(guān)節(jié)盤細(xì)胞的實驗研究[D]. 蘇雪蓮.蘭州大學(xué) 2010



本文編號：3041841