CD14是內(nèi)毒素（LPS）的特異性受體。LPS刺激機體產(chǎn)生免疫防御反應(yīng)首先需要與CD14結(jié)合，然后將信號傳入細胞內(nèi)，啟動炎癥應(yīng)答。牙髓炎、尖周炎、牙周炎等疾病均是革蘭氏陰性厭氧菌為主的混合感染，而革蘭氏陰性厭氧菌的主要毒力因子就是LPS，因此推測CD14在牙齒炎性病變過程中起重要作用。CD14在機體中以兩種形式存在：一種位于髓細胞膜，稱為膜結(jié)合CD14（mCD14）；另一種游離于血漿，稱為可溶性CD14（sCD14）。sCD14功能尚不十分清楚，據(jù)報道高濃度的sCD14可以抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，基因重組sCD14可能有治療價值�；趕CD14功能研究需要和潛在的應(yīng)用價值，用基因工程方法表達sCD14很有意義。本文從CD14的基因入手主要進行了以下實驗： 一、CD14基因重組及序列分析 以mCD14基因為模板，采用PCR方法將CD14基因進行了重組：一方面對CD14基因起始密碼上游作了真核表達優(yōu)化突變，引入Kozak序列；另一方面，根據(jù)文獻報道分別在CD14成熟肽348位和152位截短了CD14基因的3’端序列，以期得到在體外可溶性形式表達的CD14基因。PCR擴增的兩個... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮寫詞
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 CD14基因重組及序列分析
348">第二部分 用真核細胞系統(tǒng)表達rsCD14348

    實驗一 rsCD14³⁴⁸真核表達載體的構(gòu)建
348基因">    實驗二 用COS-7細胞表達rsCD14³⁴⁸基因
348在CHO-dhfr細胞的穩(wěn)定表達">    實驗三 rsCD14³⁴⁸在CHO-dhfr細胞的穩(wěn)定表達
348及活性鑒定">第三部分 免疫親和層析純化rsCD14³⁴⁸及活性鑒定
    實驗一 抗sCD14單克隆抗體制備及純化
    實驗二 免疫親和層析純化重組sCD14
    實驗三 重組sCD14的生物學(xué)活性鑒定
    實驗四 抗sCD14多克隆抗體制備及純化
第四部分 牙髓、牙齦炎中CD14功能作用的實驗研究
    實驗一 牙髓、牙齦組織中CD14的表達研究
    實驗二 免疫組織化學(xué)方法定位牙髓、牙齦組織中的CD14
文獻綜述
全文總結(jié)
致謝
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]用IRES及dhfr構(gòu)建哺乳動物細胞雙表達載體[J]. 劉國奇,陳小密,徐靜,于長明,宋宏彬,童貽剛,王海濤.  軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊. 2000(01)
[2]穩(wěn)定、高效表達血小板生成素的真核細胞株的構(gòu)建[J]. 盧柏松,陳琳,徐秀英,柳曉蘭,蔡銘杰,林圣采,黃培堂.  軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊. 1998(03)
[3]大鼠甘氨肽�；瘑窝趺冈贑HO細胞中的活性表達及在體外酰胺化修飾中的應(yīng)用[J]. 江智紅,楊宇虹,徐來根,楊新穎,夏其昌,李伯良,王德寶.  生物工程學(xué)報. 1998(02)
[4]重組人粒細胞集落刺激因子cDNA在哺乳動物細胞中高效表達的研究[J]. 陳堅,曹韞旭,陸德如.  生物工程學(xué)報. 1998(01)
[5]人補體C1－抑制物基因在COS－7細胞中的表達[J]. 楊紅玉,鄭珊珊.  中國免疫學(xué)雜志. 1996(05)
[6]外源基因在哺乳動物細胞中的高效表達[J]. 何志剛,程新波.  國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊). 1989(03)



本文編號：3035307

boshi