目的頭頸鱗狀細(xì)胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）對(duì)多種化療藥呈現(xiàn)出耐受性,免疫抑制是主要原因之一,研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)解除免疫抑制可以改善化療效果甚至達(dá)到完全緩解,因此多種免疫療法應(yīng)運(yùn)而生,除免疫檢查點(diǎn)阻滯療法等以外,另一種比較感興趣的研究是通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞釋放危險(xiǎn)相關(guān)分子模式（danger-associated molecular patterns,DAMPs）,如細(xì)胞膜表面的鈣網(wǎng)蛋白（Calreticulin,CALR）和細(xì)胞外基質(zhì)中的ATP及高遷移蛋白l（High Mobility Group Box 1 protein,HMGB1）等,從而增強(qiáng)免疫細(xì)胞的成熟、遷移、吞噬及分泌等功能,使其殺傷和吞噬腫瘤細(xì)胞,這一過(guò)程被稱(chēng)作免疫原性細(xì)胞死亡（immunogenic cell death,ICD）,且總是伴有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子真核翻譯起始因子 2a（eukaryotic translation initiation factor 2a,eIF2a）的磷酸化,因此P-eIF2a被視作ICD的生物標(biāo)記。研究發(fā)現(xiàn)一些化療藥、放療及光動(dòng)力療... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１用ＣＣＫ－８法檢測(cè)Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７細(xì)胞的增殖情況，測(cè)得ＪＱｌ對(duì)Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７細(xì)胞的??適宜工濃是４?ｕ?Ｍ和２?ｙ?Ｍ，?０Ｄ以平均士ＳＥＭ表示

后?ＢＲＤ４??的相對(duì)ｍＲＮＡ水平明顯降低。??１８１?Ｃ？Ｉ２７??（Ａ）?ＪＱ１?（Ｂ）?Ｉ?——??ＤＭＳＯ?＾?８ｈ?２４ｈ￣?｜｜＇°?Ｈ?＿?—■ａ—??＿?＿?ｍ?＿４?］?ｉ?ｊＨ?Ｂｆ｜??麵ｉＭＭＰ?Ｐ＊?Ａｃｔ?ｉｎ?＾?■ｐ＇??（Ｃ）?１?＇１?－?ＳＣＣ７??ｍｒｎｍｍ?ｍｍｍｍ?ｂｒ〇４?．?＼ｆ?ｎ??ＳＣＣ７?ｒ�！�?＿?圍圍?ｆｌ??ｍｍ?ｍａｍ?ｍｍ?ｍｍ?Ｐ－ａｃｔｍ」?－Ｊ?＿?＿?丨＿?丨■??，＇＇，??圖３－３?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)測(cè)得ＪＱｌ作用于Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７后，ＢＲＤ４蛋白表??達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。??３．?２?ＪＱ１可誘發(fā)Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７細(xì)胞中ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７向細(xì)胞膜迀移??通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)得經(jīng)ＪＱ１刺激４ｈ后Ｃａｌ２７細(xì)胞膜表面的ＣＡＬＲ和ＥＲｐ５７的??陽(yáng)性率分別為約８３．?１％和６３．９％，較對(duì)照組的１２．３％?（ＣＡＬＲ）和１８．９％?（ＥＲｐ５７）??明顯高。ＳＣＣ７細(xì)胞膜表面ＣＡＬＲ和ＥＲｐ５７陽(yáng)性表達(dá)率分別為１９．?０％和２３．?６％，經(jīng)??ＪＱ１作用后其陽(yáng)性表達(dá)率同樣明顯升高，ＣＡＬＲ約為５７．?６％，?ＥＲｐ５７約為５４．?０％?（圖??３．?２－１）；提取膜蛋白，用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ對(duì)細(xì)胞膜表面的ＣＡＬＲ及ＥＲｐ５７的表達(dá)情??況進(jìn)行半定量分析，發(fā)現(xiàn)ＪＱ１作用４ｈ后細(xì)胞膜上ＣＡＬＲ及ＥＲｐ５７的相對(duì)蛋白表達(dá)??水平均增加（圖３．?２－２和圖３．?２－３），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．?００１）；免疫熒光實(shí)??驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)經(jīng)ＪＱ１處理后的Ｃａｌ２７、ＳＣＣ７細(xì)胞膜表面的ＣＡＬＲ熒光強(qiáng)度

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???Ｃａｌ２７?ＳＣＣ７??應(yīng)＿■??■■■??ＣＴＲＬ?ＪＱｌ?４ｈ?ＣＴＲＬ?ＪＱ１４ｈ??圖３－７在共聚焦顯微鏡下觀(guān)察的ＣＡＬＲ在Ｃａｌ２７和ＳＣＣ７細(xì)胞膜表面的表??達(dá)情況??然而此時(shí)并沒(méi)有明顯的細(xì)胞凋亡，直至約２４小時(shí)才測(cè)得Ａｎｎｅｘｉｎ?ｆ細(xì)胞比??例有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖３．２－５），且主要為Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ７７?ＡＡＤ細(xì)胞，即尚在早期凋??亡階段，這一現(xiàn)象說(shuō)明ＪＱ１誘導(dǎo)的ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７在細(xì)胞膜上的暴露較為迅速，且??不是磷脂酰絲氨酸暴露的結(jié)果。??ＤＭＳＯ?ＪＱ１?８ｈ?ＪＱ１?２４ｈ?ＪＱ１?４８ｈ?＾１２７?＾??牟二?Ｇａｌｅ?Ｐ１?〇ａｔｅ?ｐｔ?＿ｃ，ａｔｅ?Ｐｉ???￣?Ｏａｉｅ?Ｐｉ?８０?？？？??＿龜？丨＃??Ｑ?＃?＾?＾?＾??＾?，ＧＡＴＥ?ｆ’?．‘ＧＡＴＥ?ｐ＿］??．?ｇａｔｅ?ｐｉ?－?６ａｔｅ?ｐｉ?２廣廣７?Ｅ３?ｅａｒｌｙ?ｓｔａｇｅ??卜，：丨?Ｗ＾＇?ｈ?＃？?１?Ｗ?５０ｌ?■?????ｊ?ｆ?�。�??＾！，ｉ?１〇．?＾?Ｓ?議Ｉ??ｊ?ｗ?ａ?，ｊｉ?ｊ?＾?，．？?ｊ．?ｙｔ，．：：』‘．．．ｉ?－ｍ?‘．ｎ?－ｉ?知?，ｕ?ｇｇｇｇｇ?ａＳＳＳ?ｇｇｇｇｇ??Ａｎｎｅｘｉｎｖ?。，，，，??圖３－８通過(guò)Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ及７－ＡＡＤ對(duì)細(xì)胞染色發(fā)現(xiàn)ＪＱｌ引起的磷脂酰絲氨酸的暴??露遠(yuǎn)落后于ＣＡＬＲ／ＥＲｐ５７的暴露??２８??


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