發(fā)布時間：2020-11-16 21:14

　　 在臨床正畸矯治過程中,正畸牙牙槽骨在正畸矯治力的作用下發(fā)生了適應(yīng)性改建,從而使正畸牙發(fā)生移動,但是在受壓力側(cè)牙周組織中會產(chǎn)生白細胞介素,腫瘤壞死因子α等多種因子,在一系列信號因子轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用下,受壓側(cè)牙根表面發(fā)生不同程度的吸收。目前,正畸學(xué)界對于牙根吸收的發(fā)生與發(fā)展機制尚未完全明了,而如何避免和減輕牙根吸收的程度是每一位正畸醫(yī)生在正畸治療過程中都應(yīng)該時刻引起重視的問題。蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶(Protein Tyrosine Phosphatases,PTPs)是細胞內(nèi)的一種調(diào)節(jié)因子,參與了許多細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,其對破骨細胞的調(diào)節(jié)作用在近年來逐漸被人們所發(fā)現(xiàn),在破骨細胞的分化、增殖、活化以及成熟等的過程中均有PTPs的參與。近年來,大量的研究顯示破骨細胞蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶(Osteoclastic protein-tyrosine phosphatase,PTP-oc)在破骨細胞的分化、形成以及其活性的調(diào)節(jié)過程中均有顯著的調(diào)控作用,也是生物體內(nèi)骨代謝活動的重要調(diào)控因子。因此深入研究PTP-oc的功能,將會為今后在正畸牙根吸收的預(yù)防和治療方面提供實驗依據(jù)。為此本研究通過免疫家兔首次制備出了PTP-oc的兔抗多克隆抗體,為后續(xù)研究PTP-oc的功能和作用機制奠定了實驗基礎(chǔ)。本研究利用構(gòu)建的p ET28a-ΔPTP-oc重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E.coliBL21(DE3)中,經(jīng)鑒定后擴增轉(zhuǎn)化成功的細菌,應(yīng)用IPTG在16℃、24h條件下誘導(dǎo)重組蛋白表達,表達產(chǎn)物經(jīng)過Q柱陰離子交換和Ni-NTA鎳離子柱親和層析獲得純化的PTP-oc重組蛋白,并用SDS-PAGE鑒定純化的PTP-oc重組蛋白。將純化后的重組蛋白作為抗原和弗氏佐劑混合后免疫家兔。采用間接ELISA法檢測第4次免疫后抗血清的效價,結(jié)果顯示抗血清效價大于1:32 000,用Protein A瓊脂糖純化抗血清獲得純化抗體,采用Western blotting法檢測經(jīng)RANKL誘導(dǎo)第5天的RAW264.7細胞中PTP-oc的表達,檢測結(jié)果顯示所得抗血清可以識別誘導(dǎo)第5天的RAW264.7細胞中的PTP-oc蛋白,抗體有較高的特異性。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R783.5
【部分圖文】：

SDS-PAGE 檢測重組 PTP-oc 的表達和純化ISA 法測定抗體效價用的是家兔背部皮下多點注射的方法進行勻后，可以在皮下組織中緩慢的釋放，可態(tài)。依據(jù)動物免疫實驗抗體產(chǎn)生的基本規(guī)體內(nèi)便會產(chǎn)生相應(yīng)抗原的抗體，但是若無價和含量將會處于較低水平，因此需在初次加強免疫，在接觸相同的抗原后，實驗抗體，且效價也會逐漸提高，本實驗在第

-PAGE 法檢測 PTP-oc 抗血中 PTP-oc 蛋白的表達屬于單核巨噬細胞系，是目前國內(nèi)外公認的破骨細 細胞經(jīng)過 RANKL 誘導(dǎo)后白，其產(chǎn)生的骨吸收陷窩較研究[43]已成功的培養(yǎng)出了，因此收集經(jīng) RANKL 誘經(jīng)過 SDS-PAGE 電泳后轉(zhuǎn)

A BWestern blotting 法檢測 RAW264.7A 為經(jīng)過 Protein A 親和層析后獲 細胞的蛋白提取物相結(jié)合，在 47 k RAW264.7 細胞中天然的 PTP-ocAPDH 的圖像。從實驗結(jié)可以看出
【參考文獻】

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本文編號：2886674