目的:探討三種巰基蛋白酶(菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶和無(wú)花果蛋白酶)在不同鹽濃度、pH值和溫度環(huán)境中水解人全唾液生物膜的效率。方法:收集非刺激性的人全唾液(whole saliva, WS),采用消散因子石英晶體微天平(QCM-D)在體外原位、實(shí)時(shí)和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)人非刺激性全唾液在Au石英晶體芯片形成生物膜,用菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶和無(wú)花果蛋白酶在不同鹽濃度、pH值和溫度環(huán)境中水解唾液生物膜。采用3倍頻和歸一化方法記錄頻率改變(△F)和能量消散因子改變(△D)隨時(shí)間的變化。用分析軟件計(jì)算膜的質(zhì)量減小量(△m)和厚度減小量(△h)。通過(guò)△m和△h評(píng)價(jià)蛋白酶水解唾液生物膜的效果。結(jié)果:菠蘿蛋白酶在鹽濃度0.001~0.01 M時(shí),△m和△h無(wú)明顯變化,高于0.01 M時(shí),△m和△h隨著鹽濃度的升高而減小。木瓜蛋白酶和無(wú)花果蛋白酶分別在鹽濃度為0.005 M和0.05 M時(shí),△m和△h最大,水解效率最高,低于或高于該鹽濃度,水解效率都降低。隨著pH值的升高,菠蘿蛋白酶的△m和△h減小,水解效率降低,即pH 5.9pH 6.9pH 7.9(P0.05);無(wú)花果蛋白酶的△m和△h增加,水解效率升高,即pH 5.9pH 6.9pH 7.9(P0.05);木瓜蛋白酶則受pH值的影響較小,在pH 5.9時(shí)較高。隨著溫度的升高,三種蛋白酶的△m和△h都增加,水解效率升高,都在35℃時(shí)最大。結(jié)論:三種巰基蛋白酶水解人全唾液生物膜的效率都受到鹽濃度、pH值和溫度的影響;三種蛋白酶之間水解效率不同,無(wú)花果蛋白酶在中性和堿性環(huán)境中水解效率最高,菠蘿蛋白酶則在酸性環(huán)境下水解效率最高。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類(lèi)】：R780.2
【部分圖文】：

10圖1 實(shí)驗(yàn)流程圖3.2 試劑的配制（1）標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：用牛血清清蛋白(BSA)，配制成 1.0 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。（2）考馬斯亮蘭 G-250 染料試劑：稱(chēng) 10 mg 考馬斯亮蘭 G-250，溶于 5 mL 95%的乙醇后，再加入 12 mL 85%的磷酸，用水稀釋至 100 mL。（3）0.2 mol/L，pH 6.9 的磷酸鈉鹽緩沖液：用分析天平準(zhǔn)確量取 1.4040 gNaH2PO4·2H2O 和 3.9395 g Na2HPO4·12H2O，溶解于 50 mL 超純水中，在磁力攪拌器上攪拌至完全溶解

圖 3 WS 吸附于 Au 表面，△F 和△D 隨時(shí)間的變化曲線(xiàn)2.2 Au 表面吸附的唾液生物膜的特性WS 吸附于 Au 表面達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)時(shí) m 和 h 的數(shù)值見(jiàn)表 3，均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差見(jiàn)表 4。結(jié)果顯示本研究共做 108 次實(shí)驗(yàn)，每次在 Au 表面吸附得到的唾液生物膜的質(zhì)量（m）為 1017±36 ng/cm2，厚度（h）為 9.21±1.20 nm。表 3 唾液生物膜的△F、△D、m 和 h 的測(cè)量值樣本號(hào)△F(Hz)△D(10-6)m(ng/cm2)h(nm)樣本號(hào)△F(Hz)△D(10-6)m(ng/cm2)h(nm)1 173.24 6.00 1020 9.10 55 174.94 9.50 1030 8.402 161.35 6.70 950 7.60 56 171.54 7.60 1010 8.603 172.39 6.00 1015 9.80 57 169.84 10.00 1000 7.904 167.29 7.50 985 9.00 58 169.84 8.00 1000 8.505 170.69 6.00 1005 8.75 59 178.33 9.00 1050 12.00

圖 4 不同鹽濃度菠蘿蛋白酶水解唾液生物膜，△F 和△D 隨時(shí)間的變化曲線(xiàn)(a)C=0.001M;(b)C=0.005M;(c)C=0.01M;(d)C=0.03M;(e)C=0.05M;(f)C=0.07M
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 翟怡,張金利,李韡,王一平;自組裝單層膜的制備與應(yīng)用[J];化學(xué)進(jìn)展;2004年04期

2 曲和之;黃露;張國(guó)華;柴智;張雷;郝東云;王曉平;;無(wú)花果蛋白酶與木瓜蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)的比較[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版);2008年06期

3 ;無(wú)花果蛋白酶的制備[J];技術(shù)與市場(chǎng);2008年11期

4 陳國(guó)洋;姚江武;陶濤;;消散因子石英晶體微天平監(jiān)測(cè)人唾液在金表面形成生物膜的過(guò)程[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2009年01期

5 王娟娟,晁小練,楊祖培;分子自組裝技術(shù)的研究現(xiàn)狀[J];塑料科技;2004年04期

本文編號(hào)：2886610