研究背景： 頭頸部惡性腫瘤約占全身惡性腫瘤的5.6%,其中80%是鱗癌。而口腔鱗癌是頭頸部惡性腫瘤中比較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。近幾年來(lái),隨著對(duì)于腫瘤發(fā)病機(jī)制和治療的研究進(jìn)展,口腔鱗癌的生存率有了顯著提高,5年生存率約60%�？谇击[癌的發(fā)病是一個(gè)多因素多步驟的過(guò)程,包括眾多的致病因素,如放射線、不良牙體刺激等物理因素,酒精、煙草等化學(xué)刺激,微量元素的缺乏等營(yíng)養(yǎng)因素,等等。最近幾年,隨著腫瘤免疫學(xué)的研究進(jìn)展,對(duì)于口腔腫瘤致病的免疫學(xué)研究受到了越來(lái)越多的重視。機(jī)體免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的改變,腫瘤特異性抗原改變都有可能導(dǎo)致機(jī)體對(duì)于腫瘤細(xì)胞免疫監(jiān)視的缺失,造成腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。 胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(thymic stromal lymphopoietin, TSLP)是一種與IL一7類似的細(xì)胞因子,由Friend1994年從胸腺基質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)上清中分離獲得。TSLP在免疫學(xué)領(lǐng)域研究較多,TSLP的主要作用是可以促進(jìn)T細(xì)胞增殖以及B淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化,而且與樹(shù)突狀細(xì)胞的成熟、活化和遷移的調(diào)控密切相關(guān),并在胸腺的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用。TSLP可以在多種組織細(xì)胞中表達(dá),包括部分腸道上皮、受刺激后的胃粘膜、食管黏膜上皮、心臟、肝臟、前列腺細(xì)胞等等。最近的幾年研究發(fā)現(xiàn),TSLP可以在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá),包括乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌,等等。腫瘤中的TSLP可以促進(jìn)Th2型細(xì)胞的增殖、分化或募集,并與多種腫瘤細(xì)胞的增殖和血管生成密切相關(guān)。 關(guān)于TSLP在口腔鱗癌中的表達(dá)的研究罕見(jiàn)報(bào)道。本文擬采用多種實(shí)驗(yàn)方法研究口腔鱗癌組織中的TSLP的表達(dá),并且探討TSLP在口腔鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)和腫瘤細(xì)胞的增殖、腫瘤微環(huán)境中免疫狀態(tài)的改變的關(guān)系,以期為口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制研究提供參考。 第一部分口腔鱗癌中TSLP的表達(dá)及臨床意義 口腔鱗癌是頭頸部惡性腫瘤的的一種常見(jiàn)的腫瘤。胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素是一種與IL一7類似的細(xì)胞因子,可以在多種組織細(xì)胞和免疫細(xì)胞表面有表達(dá)。最近的研究發(fā)現(xiàn)TSLP可以在多種腫瘤細(xì)胞中有表達(dá),可以通過(guò)多種機(jī)制促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。但是TSLP在口腔鱗癌中的表達(dá)還未見(jiàn)報(bào)道。鑒于此,本部分實(shí)驗(yàn)首先研究TSLP在口腔鱗癌中的表達(dá)情況,并探討其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 目的與方法 選取30例具有完整臨床病理資料的口腔鱗癌患者的組織學(xué)標(biāo)本和外周血為研究對(duì)象,并選取10例正常的口腔黏膜作為對(duì)照,采用免疫組化的方法和RT-PCR方法,分別從蛋白水平和mRNA水平比較TSLP、TSLP-R在口腔鱗癌和正常組織中的表達(dá)的差異,并用ELISA方法比較口腔鱗癌患者和正常對(duì)照外周血中TSLP濃度的變化,結(jié)合患者的臨床病理資料,分析TSLP在口腔鱗癌中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。 結(jié)果 通過(guò)免疫組化的染色,我們發(fā)現(xiàn)TSLP和TSLP-R在口腔鱗癌組織及癌旁組織中都呈高表達(dá),而在正常組織的上皮細(xì)胞中僅僅是弱表達(dá)或者無(wú)表達(dá),鱗癌組織中TSLP的mRNA的量是正常組織中的1.9185倍,口腔鱗癌組織和正常對(duì)照組織中的TSLP-mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.016516士0.003522和0.008609士0.00045;口腔鱗癌患者外周血中TSLP的平均濃度是26.16士13.37,而正常對(duì)照的外周血濃度是3.35士3.31,患者組的TSLP的濃度顯著高于對(duì)照組(P0.001)�？谇击[癌患者腫瘤細(xì)胞中的TSLP的表達(dá)與患者的臨床分期、病理分級(jí)、年齡、性別都無(wú)顯著相關(guān)性。口腔鱗癌細(xì)胞本身及周?chē)䴘?rùn)淋巴細(xì)胞同時(shí)存在著TSLP-R的高表達(dá),染色集中在胞漿中和胞膜上。TSLP-R在口腔鱗癌和癌旁組織中的表達(dá)并無(wú)顯著差異,但是都顯著高于正常的對(duì)照組織。 結(jié)論 口腔鱗癌組織及癌旁組織中存在著較高的TSLP和TSLP-R的表達(dá),口腔鱗癌患者的組織和外周血中TSLP和TSLP-R的表達(dá)都顯著高于正常對(duì)照,口腔鱗癌組織中TSLP和患者的臨床病理參數(shù)之間并無(wú)顯著相關(guān)性。但是腫瘤細(xì)胞分泌的TSLP可以直接作用于自身及周?chē)䴘?rùn)的大量淋巴細(xì)胞。 第二部分口腔鱗癌中TSLP和FOXP3的表達(dá)及關(guān)系研究 腫瘤微環(huán)境中的免疫調(diào)節(jié)的改變是促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素。前期的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了口腔鱗癌組織中存在著TSLP和TSLP-R的高表達(dá)。TSLP-R不但可以表達(dá)在腫瘤細(xì)胞自身,還可以表達(dá)在腫瘤周?chē)䴘?rùn)的淋巴細(xì)胞的表面。TSLP無(wú)論在外周還是在胸腺中,都可以誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的分化成熟,腫瘤的微環(huán)境中存在的CD4+CD25+Treg細(xì)胞本身即是一種重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,它可以抑制機(jī)體對(duì)于腫瘤細(xì)胞的特異性的免疫反應(yīng),導(dǎo)致腫瘤的免疫逃逸。FOXP3是CD4+CD25+Treg的功能狀態(tài)的特異性的抗原。本實(shí)驗(yàn)就是通過(guò)研究口腔鱗癌組織微環(huán)境中存在的FOXP3+的Treg細(xì)胞,結(jié)合TSLP和TSLP-R的表達(dá),探討TSLP在口腔鱗癌中的表達(dá)與FOXP3+淋巴細(xì)胞之間可能存在的關(guān)系。 目的及方法 選取30例具有完整臨床病理資料的口腔鱗癌患者的組織學(xué)標(biāo)本作為研究對(duì)象,首先運(yùn)用免疫組化的單染,研究FOXP3在口腔鱗癌組織中的表達(dá),結(jié)合TSLP-R在組織中的表達(dá)狀況,運(yùn)用免疫組化雙染TSLP-R和FOXP3,研究口腔鱗癌中表達(dá)的TSLP和FOXP3+的淋巴細(xì)胞之間的關(guān)系,從而探討TSLP在口腔鱗癌組織微環(huán)境中免疫學(xué)調(diào)節(jié)改變的作用。 結(jié)果 1.口腔鱗癌組織中可見(jiàn)較多的FOXP3陽(yáng)性淋巴細(xì)胞的存在。腫瘤組和癌旁組FOXP3+陽(yáng)性淋巴細(xì)胞比例分別為(23.32±4.30)%VS(18.24±4.80)%,而正常的對(duì)照組中FOXP3+淋巴細(xì)胞則罕見(jiàn)�？谇击[癌組織和癌旁組織中FOXP3陽(yáng)性淋巴細(xì)胞比例都顯著高于口腔正常對(duì)照黏膜組織。癌旁組織中,同樣可見(jiàn)大量的FOXP3陽(yáng)性的淋巴細(xì)胞存在。 2.口腔鱗癌細(xì)胞巢周?chē)䴘?rùn)的淋巴細(xì)胞中可見(jiàn)較多的TSLP-R陽(yáng)性的淋巴細(xì)胞,呈團(tuán)或散在存在 3.在口腔鱗癌組織的浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中,存在著一定數(shù)量的的TSLP和FOXP3雙染的淋巴細(xì)胞。在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中,我們也發(fā)現(xiàn)了部分的雙染細(xì)胞的存在,而在正常淋巴結(jié)中則并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)雙染細(xì)胞的存在。結(jié)論 口腔鱗癌組織中不但存在著大量的FOXP3陽(yáng)性的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),而且在這些FOXP3+細(xì)胞的表面還存在著一定數(shù)量的TSLP-R,口腔鱗癌細(xì)胞中分泌的TSLP,通過(guò)作用于表面具有TSLP-R的淋巴細(xì)胞,促進(jìn)FOXP3+Treg細(xì)胞的分化,成熟或聚集,同時(shí)淋巴結(jié)內(nèi)存在的TSLP,通過(guò)作用于TSLP-R表達(dá)陽(yáng)性的淋巴細(xì)胞,也可誘導(dǎo)FOXP3+的Treg淋巴細(xì)胞的分化及募集,而后者保護(hù)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌細(xì)胞免于淋巴細(xì)胞的殺滅作用,促進(jìn)口腔鱗癌的淋巴轉(zhuǎn)移。 第三部分TSLP與口腔鱗癌細(xì)胞增殖的關(guān)系研究 腫瘤細(xì)胞的失控增殖是腫瘤發(fā)生的重要因素。在第一部分實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)了口腔鱗癌細(xì)胞不但可以分泌大量的TSLP,存在著TSLP的高表達(dá),并且發(fā)現(xiàn)了TSLP-R在自身胞漿和胞膜中的表達(dá)。口腔鱗癌分泌的TSLP可以通過(guò)與其表面表達(dá)的TSLP-R結(jié)合,以自分泌的方式作用于腫瘤細(xì)胞自身。TSLP在最初發(fā)現(xiàn)時(shí)即發(fā)現(xiàn)具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用,組織細(xì)胞中分泌的TSLP可以直接或間接的促進(jìn)多種組織或免疫細(xì)胞的增殖�？谇击[癌中分泌的TSLP通過(guò)與自身的受體結(jié)合對(duì)于口腔鱗癌細(xì)胞的增殖又是否有關(guān)呢?因此本部分實(shí)驗(yàn)的主要目的就是探討口腔鱗癌腫瘤細(xì)胞中分泌的TSLP與自身增殖的關(guān)系。 目的與方法 選取口腔鱗癌Tca8113細(xì)胞系作為研究對(duì)象,培養(yǎng)稀薄,待細(xì)胞恢復(fù)活力后,分別在細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入TSLP、TSLP中和抗體,并且設(shè)立陰性對(duì)照,在不同時(shí)間點(diǎn),運(yùn)用MTT法研究細(xì)胞的增殖狀況并加以比較,分析三組間細(xì)胞增殖的變化,探討TSLP對(duì)于Tca8113細(xì)胞增殖的作用。 結(jié)果 1.分別加入TSLP、TSLP中和抗體及PBS24小時(shí)后,三組細(xì)胞均出現(xiàn)了不同程度的增殖現(xiàn)象,其中TSLP組的增殖稍高于對(duì)照組和TSLP中和抗體組,但是差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而對(duì)照組和TSLP中和抗體組的增殖無(wú)明顯差異。 2.加藥48小時(shí),TSLP組和對(duì)照組的腫瘤細(xì)胞均出現(xiàn)了較為明顯的增殖,但是TSLP組的增殖更為明顯,而TSLP中和抗體組的增殖緩慢,三組相比較,發(fā)現(xiàn)TSLP組的增殖顯著高于對(duì)照組及中和抗體組,而對(duì)照組和中和抗體組的增殖差別并不明顯。 3.加藥后72小時(shí),對(duì)照組和TSLP組均出現(xiàn)了更為明顯的增殖,三組相比較,TSLP組顯著高于中和抗體組和對(duì)照組,而對(duì)照組的增殖也顯著高于中和抗體組,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 口腔鱗癌細(xì)胞分泌的TLSP可以直接作用于自身腫瘤細(xì)胞,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖,TSLP對(duì)于細(xì)胞的增殖促進(jìn)作用,在口腔鱗癌發(fā)生的早期即已發(fā)生,從而促進(jìn)口腔鱗癌的發(fā)生和進(jìn)展。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R739.8
【文章目錄】：
中文摘要
abstract
符號(hào)說(shuō)明
第一部分 口腔鱗癌中TSLP的表達(dá)及臨床意義
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    附錄圖表
第二部分 口腔鱗癌中TSLP和FOXP3的表達(dá)及關(guān)系研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    附錄圖表
第三部分 TSLP與口腔鱗癌細(xì)胞增殖的關(guān)系研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    附圖表
總結(jié)論
課題創(chuàng)新性與意義
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士期間發(fā)表論文
英文論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表

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本文編號(hào)：2882822