目的口腔鱗癌(OSCC)是我國口腔頜面部腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一,常有區(qū)域淋巴結(jié)和遠處轉(zhuǎn)移。針對口腔鱗癌治療困難、致死率高的特點,越來越多的學(xué)者將目光聚集在分子靶向治療上。目前,針對性分子靶向治療手段,逐漸成為OSCC綜合序列治療中至關(guān)重要的一部分,而尋求更精準有效的分子靶點,也成為了OSCC治療的關(guān)鍵。一些研究表明,VGPC與多種癌癥密切相關(guān),包括口腔鱗癌。其中,VGPC亞型Kv3.4與腫瘤的關(guān)系是一個熱門話題。本研究旨在探究Kv3.4在口腔鱗癌細胞中的表達,以及改變Kv3.4表達水平后引起的口腔鱗癌細胞侵襲、增殖、凋亡改變,從而驗證Kv3.4與口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián),并初步探索其作用機制,為口腔鱗癌的預(yù)防與治療尋找新靶點。方法培養(yǎng)口腔鱗癌細胞系SCC3,并使用激光共聚焦顯微鏡確認Kv3.4在SCC3細胞中的表達。使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染小干擾RNA(siRNA-KCNC4),敲除OSCC細胞系SCC3中表達Kv3.4的KCNC4基因,使用qRT-PCR和Western Blot驗證Kv3.4在mRNA和蛋白質(zhì)表達水平的改變。使用CCK-8、Transwell檢測轉(zhuǎn)染后SCC3細胞增殖和侵襲能力的變化。流式細胞儀用于檢測轉(zhuǎn)染后的細胞凋亡和細胞周期變化。使用Western Blot檢測細胞周期蛋白、侵襲相關(guān)蛋白表達水平變化。對實驗檢測所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)檢驗,分析兩組數(shù)據(jù)使用t檢驗,分析超過兩組數(shù)據(jù)使用單因素方差分析。結(jié)果免疫細胞化學(xué)顯示Kv3.4在SCC3細胞的細胞質(zhì)與細胞膜上廣泛表達。轉(zhuǎn)染siRNA-KCNC4后,隨著Kv3.4表達水平降低,SCC3細胞的增殖能力下降(P0.001),侵襲能力下降(P0.001),凋亡增加(P0.001),這表明Kv3.4可能參與口腔鱗狀細胞癌的發(fā)展。實驗結(jié)果同時表明,KCNC4基因敲除后細胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E1和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)表達顯著下降,細胞周期G0/G1停滯,這代表著Kv3.4對口腔鱗癌的調(diào)控,可能是通過周期蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶來實現(xiàn)。結(jié)論Kv3.4可以通過調(diào)控細胞周期、調(diào)控MMPs表達,影響口腔鱗癌的生物學(xué)行為。推測Kv3.4可能是口腔鱗癌侵襲、增殖和凋亡調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的重要靶點,具有進一步研究的價值。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

1：Kv3.4 在 SCC3 細胞中的定位。A：DAPI 將細胞核染為藍色。B：Kv3.4 蛋染為紅色。C：二者合成圖像。igure 1: Locate Kv3.4 in the SCC3 cell line..2 SiRNA 轉(zhuǎn)染效果評估通過 qRT-PCR 和 Western blot 實驗證實 siRNA 降低了 Kv3.4 的表達水平。RT-PCR 實驗證明，轉(zhuǎn)染三條 siRNA 后，KCNC4 基因的 mRNA 的相對表達量分為：s1（0.13±0.01），s2（0.16±0.07），s3（0.1±0.03），與 control 組（1±0.22）比，表達水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=39.1，P<0.001）。而 mock 組0.74±0.07）和 si-NC 組（0.84±0.13）與 control 組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。中，s3 具有最高的沉默效率（見圖 2）。Western blot 實驗證明，s3 組的 Kv3.4

圖 7：沉默 KCNC4 后侵襲和凋亡相關(guān)蛋白表達水平的變化。A：cyclin D1 和 cyclinE1 蛋白表達水平下降。B：MMP-9 蛋白表達水平降低。C：caspase-3 和 cleavedcaspase-3 蛋白表達水平增加。Figure 7: Changes in the expression levels of invasion and apoptosis related proteinsafter silencing KCNC4. A: cyclin D1 and cyclin E1 protein expression level decreased.B: MMP-9 protein expression level decreased. C: caspase-3 and cleavedcaspase-3protein expression level increased.5 討論Kv3.4 屬于 Kv1-9 亞家族，由 KCNC4 基因編碼。研究顯示，電壓門控鉀離子通道的光譜阻斷劑能夠抑制多種細胞增殖能力，這可能是由于 VGPC 異常表達，
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本文編號：2882723