研究背景： 口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)是一種慢性炎癥性口腔粘膜病，其組織學(xué)特征是上皮基底細(xì)胞的液化變性和固有層大量的T淋巴細(xì)胞呈帶狀浸潤(rùn)。目前大多數(shù)研究認(rèn)為該病與免疫反應(yīng)的異常有關(guān)。各種炎癥介質(zhì)，包括細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、粘附因子、蛋白酶類(lèi)等在介導(dǎo)這一異常的免疫反應(yīng)中起著主要作用。近年研究發(fā)現(xiàn)，口腔扁平苔蘚患者血清中TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6等多種細(xì)胞因子分泌水平增高，高度提示細(xì)胞因子紊亂在口腔扁平苔蘚的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。然而迄今為止，口腔扁平苔蘚患者炎癥介質(zhì)調(diào)控和釋放的確切機(jī)制尚不明確。目前，核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)對(duì)炎癥介質(zhì)的調(diào)控作用成為近年來(lái)廣受關(guān)注的研究課題。NF-κB是一類(lèi)能與多種基因啟動(dòng)子發(fā)生特異性結(jié)合并增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄的一種蛋白質(zhì)因子�；罨腘F-κB與靶基因結(jié)合后即可調(diào)節(jié)其基因轉(zhuǎn)錄并促進(jìn)其表達(dá)。因此，從NF-κB角度研究口腔扁平苔蘚的發(fā)病機(jī)理進(jìn)而尋找病情監(jiān)控、療效檢測(cè)的敏感指標(biāo)，探索口腔扁平苔蘚治療新策略是研究的新方向，具有深遠(yuǎn)的理論意義和臨床實(shí)用價(jià)值。 研究目的： 1．探討口腔扁平苔蘚患者血清和唾液中NF-κB依賴性炎性介質(zhì)TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的表達(dá)情況及其臨床意義，并從中篩選出有利于指導(dǎo)臨床的敏感性指標(biāo)。 2．檢測(cè)NF-κB、MMP-9蛋白在口腔扁平苔蘚病損部位組織中表達(dá)情況，揭示其在口腔扁平苔蘚發(fā)病機(jī)制中的作用、二者表達(dá)的相互關(guān)系及其與臨床病理特征之間的關(guān)系。 3．探討NF-κB信息通路在口腔扁平苔蘚患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood monouclear cells，PBMC)中對(duì)MMP-9表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。 研究方法： 1．口腔扁平苔蘚患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的檢測(cè)。30例資料完整的口腔扁平苔蘚患者(糜爛型16例，網(wǎng)紋型14例)和30例健康志愿者納入研究，同時(shí)配對(duì)收集其血清和唾液樣本。采用ELISA法對(duì)樣本中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的含量進(jìn)行測(cè)定，分析四個(gè)指標(biāo)在血清和唾液中表達(dá)的相關(guān)性。 2．采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)22例口腔扁平苔蘚患者(糜爛型和網(wǎng)紋型各11例)及10例正�？谇徽衬ぶ蠳F-κB p65、MMP-9蛋白的表達(dá)情況，分析NF-κB p65、MMP-9蛋白表達(dá)的相關(guān)性。 3．分離口腔扁平苔蘚患者PBMC體外培養(yǎng)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法、ELISA法觀察經(jīng)10ng／mlTNF-α刺激24h后，PBMC中NF-κB的活化狀況，以及PBMC表達(dá)MMP-9的量的變化；運(yùn)用NF-κB的特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)預(yù)處理抑制NF-κB的活化，觀察TNF-α對(duì)體外培養(yǎng)的口腔扁平苔蘚患者PBMC中MMP-9蛋白表達(dá)量影響的改變。 研究結(jié)果： 1．口腔扁平苔蘚患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的檢測(cè)結(jié)果：①與健康對(duì)照組相比，口腔扁平苔蘚患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9均有不同程度的增高。進(jìn)一步對(duì)口腔扁平苔蘚的兩種亞型進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)血清中上述四個(gè)指標(biāo)在糜爛型與網(wǎng)紋型中的表達(dá)未見(jiàn)明顯差別；糜爛型口腔扁平苔蘚唾液中IL-8和MMP-9的含量較網(wǎng)紋型口腔扁平苔蘚明顯增高；②口腔扁平苔蘚患者唾液TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9的表達(dá)較血清明顯增高，TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9在兩種檢測(cè)媒介中的表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系。 2．NF-κB p65蛋白在口腔扁平苔蘚中陽(yáng)性率為77.3％，而在正�？谇徽衬そM僅有1例呈弱陽(yáng)性表達(dá)。其在網(wǎng)紋型口腔扁平苔蘚中陽(yáng)性率為54.5％，糜爛型口腔扁平苔蘚陽(yáng)性率為100％，兩組之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.04＜0.05)。MMP-9蛋白在口腔扁平苔蘚中陽(yáng)性率為63.63％，而在正�？谇徽衬そM僅有1例呈弱陽(yáng)性表達(dá)。其在網(wǎng)紋型口腔扁平苔蘚中陽(yáng)性率為36.4％，糜爛型OLP中陽(yáng)性率為90.9％，兩組之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.03＜0.05)�？谇槐馄教μ\中NF-κB p65與MMP-9蛋白表達(dá)存在較高吻合度(κ=0.68，P=0.00＜0.05)。 3．PDTC可阻斷口腔扁平苔蘚患者PBMC源性MMP-9的誘導(dǎo)生成。應(yīng)用TNF-α(10ng／ml)作用24h后，OLP組PBMC NF-κB p65細(xì)胞染色陽(yáng)性率、培養(yǎng)上清液MMP-9蛋白含量明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而培養(yǎng)體系預(yù)先應(yīng)用PDTC(100μmol／L)處理，再用TNF-α(10ng／ml)刺激，OLP組PBMC NF-κB細(xì)胞染色陽(yáng)性率和培養(yǎng)上清中MMP-9的分泌量較未加入PDTC組明顯下降。 結(jié)論： 1．唾液作為檢測(cè)媒介在口腔扁平苔蘚的臨床診治中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。 2．唾液IL-8和MMP-9含量的測(cè)定可能成為口腔扁平苔蘚病情監(jiān)控的敏感指標(biāo)。 3．MMP-9在口腔扁平苔蘚病損中的高表達(dá)可能是由于各種誘因激活NF-κB的活化而引發(fā)的。NF-κB信息通路的活化可能在口腔扁平苔蘚的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用，同時(shí)提示阻斷NF-κB信息通路的激活可能成為治療口腔扁平苔蘚藥物新的研發(fā)靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類(lèi)】：R781.5
【部分圖文】：

差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩種類(lèi)型的OLP之間做t檢驗(yàn)，糜爛型OLP唾液中IL一8、MMP一9唾液中的含量高于網(wǎng)紋型，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(見(jiàn)表1一2，圖1一2)

正常口腔粘膜上皮NF一沼p65免疫組織化學(xué)染色圖譜200‘

口腔扁平苔薛NF一沼p65免疫組織化學(xué)染色圖譜200‘6l
【參考文獻(xiàn)】

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1 方勇飛,王勇,周新,鐘兵,柏干蘋(píng),張春;青藤堿對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞因子表達(dá)的影響[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2003年08期

2 李亞清;張珍祥;徐永健;熊盛道;楊朝;倪望;陳仕新;馬丹;;COPD患者肺泡巨噬細(xì)胞源性MMP-9的表達(dá)及其酶活性變化[J];中華內(nèi)科雜志;2006年01期

本文編號(hào)：2879219