人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)為線狀雙鏈DNA病毒,是基因組最大的病毒之一,其感染在世界范圍內(nèi)廣泛存在。我國(guó)是CMV感染的高發(fā)地區(qū),2歲以下兒童往往就已經(jīng)感染CMV,兒童血清抗體陽性率為83.2%-87.3%,成人血清CMV抗體陽性率則高達(dá)95%,但大多為無臨床癥狀的隱性感染或機(jī)會(huì)性感染。CMV可以在體內(nèi)長(zhǎng)期潛伏,其潛伏部位主要在唾液腺、乳腺、腎臟等,當(dāng)機(jī)體免疫功能低下時(shí),病毒會(huì)被激活而導(dǎo)致多種疾病。CMV感染可導(dǎo)致多種口腔疾病,如涎腺炎、舍格倫綜合癥、牙周炎、復(fù)發(fā)性潰瘍及腺體腫瘤等,嚴(yán)重影響人們的口腔健康。國(guó)內(nèi)外學(xué)者已對(duì)CMV致病機(jī)制、預(yù)防和治療措施進(jìn)行了廣泛而深入的研究,認(rèn)識(shí)到細(xì)胞免疫在限制CMV傳播和潛伏病毒激活中起主要作用,主要與CD8＋T淋巴細(xì)胞作用有關(guān)；另外,在CMV感染的急性期,機(jī)體受侵入病毒刺激亦產(chǎn)生相應(yīng)的體液免疫,其中分泌型IgA作為外分泌液中的主要抗體類別,參與粘膜局部免疫,通過阻抑粘附、中和病毒等方式在局部抗CMV感染中發(fā)揮重要作用。 趨化性細(xì)胞因子是一個(gè)由分子量多為8-16kDa的多肽組成的,有20%-70%的氨基酸同源性的蛋白質(zhì)家族,其與相應(yīng)跨膜G蛋白受體相互作用,調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的遷移和活化,在天然免疫和獲得性免疫中起重要作用。根據(jù)末端的半胱氨酸的位置、排列方式和數(shù)量,趨化性細(xì)胞因子被分為CXC、CC、C和CX3C四個(gè)亞家族。CCL28,又稱粘膜相關(guān)上皮趨化因子(mucosae associated epithelia chemokine, MEC),是由Wang等人于2000年發(fā)現(xiàn)的一種在基因定位、蛋白質(zhì)序列上有其獨(dú)特性的CC家族趨化性細(xì)胞因子,由多種粘膜上皮組織細(xì)胞表達(dá)。CCL28受體為CCR10和CCR3,主要由CD4＋T細(xì)胞,CD8＋T細(xì)胞,IgA＋抗體分泌細(xì)胞(Antibody secreting cell, ASC)和嗜酸性粒細(xì)胞等表達(dá),與配體CCL28和α4β1high/血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)相結(jié)合,在穩(wěn)態(tài)運(yùn)輸中發(fā)揮重要作用。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí),CCL28具有抗微生物活性和粘膜富集特性,與粘膜其他抗微生物因素一起產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),構(gòu)成了廣譜的抗微生物保護(hù)層。更重要的是CCL28與其受體的結(jié)合,對(duì)IgA+ASC及CD8+淋巴細(xì)胞的游走、遷徙、歸巢以及在免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB是一種多極性基因調(diào)控蛋白,由Rel蛋白家族中的成員以同源或異源二聚體的形式存在。NF-κB系統(tǒng)由NF-κB家族及其抑制物IκB家族共同組成,幾乎存在于所有細(xì)胞中。目前發(fā)現(xiàn)多種因素：病毒、細(xì)菌毒性產(chǎn)物L(fēng)PS、雙鏈RNA等；炎性細(xì)胞因子；物理化學(xué)因子；致凋亡因子等可誘導(dǎo)NF-κB活化,從而啟動(dòng)一系列靶基因的轉(zhuǎn)錄,參與調(diào)控多種重要免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)、粘附分子及蛋白酶類的表達(dá),從而對(duì)免疫細(xì)胞的活化、增殖、浸潤(rùn)、趨化和分泌功能起著直接的調(diào)控作用。因此,NF-κB在免疫系統(tǒng)中有著舉足輕重的地位,是許多免疫過程相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的樞紐,通過影響免疫細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性可直接或間接調(diào)控機(jī)體的免疫狀態(tài)。 國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)證實(shí),多種細(xì)胞因子或蛋白在體內(nèi)的表達(dá)都是通過NF-κB途徑來實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)的,包括①細(xì)胞因子與生長(zhǎng)因子,如IL-2、3、6、8、12、IL-1β、TNFα、G-CSF、M-CSF、GM-CSF、EPO等；②免疫受體,如免疫球蛋白κ輕鏈、T細(xì)胞受體儀α、β鏈MHC-Ⅰ、Ⅱ、β2微球蛋白等；③粘附分子,如細(xì)胞間粘附分子-1、血管細(xì)胞粘附分子-1、內(nèi)皮細(xì)胞白細(xì)胞間粘附分子等；④急性期蛋白,如血管緊張肽酶、補(bǔ)體因子C4、補(bǔ)體因子B等；⑤炎癥酶,如誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶、誘導(dǎo)型環(huán)加氧酶、胞質(zhì)磷脂酶等。但至今未見關(guān)于NF-κB調(diào)節(jié)CCL28表達(dá)的相關(guān)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)報(bào)道。 目的： 本研究中,我們構(gòu)建感染MCMV的BALB/c小鼠動(dòng)物模型,證實(shí)感染成功后,取其頜下腺,檢測(cè)感染MCMV后BALB/c小鼠頜下腺中CCL28在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化；然后應(yīng)用PDTC抑制NF-κB途徑,進(jìn)一步觀察BALB/c小鼠頜下腺中CCL28的表達(dá)變化,并探討分析其與NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)性,從而為進(jìn)一步探索相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的具體機(jī)制奠定理論基礎(chǔ),以期為治療CMV相關(guān)口腔疾病提供新的思路。 方法： 1.培養(yǎng)3T3細(xì)胞,傳代第二天接種MCMV病毒,待80%-90%細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞病變時(shí),收集病毒,CPE法測(cè)定病毒滴度,參考文獻(xiàn)注射劑量,用上述病毒感染BALB/c小鼠,ELISA法證實(shí)動(dòng)物模型構(gòu)建是否成功,HE染色觀察唾液腺炎癥浸潤(rùn)情況。 2.參考MCMV感染高峰期時(shí)間窗,分別于第7天和第15天處死正常組和MCMV感染組BALB/c小鼠,無菌分離出頜下腺,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting分別從mRNA和蛋白水平檢測(cè)感染MCMV后的BALB/c小鼠頜下腺中CCL28的表達(dá)變化。 3.BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組：a組為空白對(duì)照組,b組小鼠接種5×104PFU／只MCMV200μ1;c組接種MCMV病毒后,每天經(jīng)腹腔注射PDTC抑制NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的活化,7天后處死小鼠,無菌分離出頜下腺,分別檢測(cè)CCL28的表達(dá)變化及NF-κB的活化程度,并探討分析兩者之間有無相關(guān)性。 結(jié)果： 1.3T3細(xì)胞感染MCMV后出現(xiàn)CPE,經(jīng)測(cè)定MCMV病毒滴度為4.68×106TCID50, ELISA檢測(cè)MCMV感染組小鼠100%抗MCMV-IgM陽性,說明小鼠100%感染MCMV,小鼠病毒模型構(gòu)建成功。HE染色觀察顯示感染組小鼠唾液腺導(dǎo)管周圍有單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),部分出現(xiàn)導(dǎo)管變性。 2.感染MCMV的BALB/c小鼠第7天時(shí)頜下腺中CCL28mRNA和蛋白表達(dá)量均較正常組顯著升高；但第15天時(shí)頜下腺中CCL28mRNA和蛋白表達(dá)量較正常組稍有升高,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但較第7天感染組明顯下降,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.Western blotting顯示跟單純MCMV感染組相比較,PDTC抑制組中NF-κB的活化程度明顯降低,同時(shí)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting顯示經(jīng)PDTC抑制NF-κB活化后BALB/c小鼠頜下腺中CCL28的表達(dá)量均較單純MCMV感染組明顯降低。 結(jié)論： 1.感染MCMV的BALB/c小鼠病毒模型構(gòu)建成功,病理切片證實(shí)BALB/c小鼠唾液腺有MCMV感染所致的典型病變。 2.BALB/c小鼠感染MCMV急性期時(shí)頜下腺中CCL28表達(dá)量明顯升高,考慮是因?yàn)楦腥炯毙云谛∈篌w內(nèi)MCMV大量復(fù)制,增強(qiáng)了影響CCL28mRNA合成的轉(zhuǎn)錄因子的誘導(dǎo)活化作用,從而使其頜下腺組織CCL28表達(dá)顯著增高。隨著CCL28表達(dá)增多,CCR10＋免疫細(xì)胞(CD4+/CD8+T細(xì)胞、IgA+ASC和嗜酸性粒細(xì)胞)遷徙歸巢至感染頜下腺組織的數(shù)量增加,進(jìn)而有利于局部免疫應(yīng)答反應(yīng),控制MCMV感染進(jìn)一步惡化使感染進(jìn)入慢性期,從而使影響CCL28mRNA合成的轉(zhuǎn)錄因子的誘導(dǎo)活化作用較前減弱,故急性期過后CCL28的表達(dá)量降低,趨于正常水平。 3.PDTC抑制組BALB/c小鼠頜下腺中CCL28的表達(dá)量較單純MCMV感染組明顯降低,說明在PDTC有效抑制NF-κB的活化后,CCL28表達(dá)相應(yīng)的降低,從而證明NF-κB的確對(duì)CCL28的表達(dá)起著一定的調(diào)控作用,即通過NF-κB途徑可以實(shí)現(xiàn)對(duì)CCL28表達(dá)的正向調(diào)節(jié),這就為探討以CCL28趨化免疫細(xì)胞至粘膜相應(yīng)部位發(fā)揮抗CMV感染作用提供了一條新的治療思路。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R781.7
【文章目錄】：
目錄
CONTENTS
中文摘要
ABSTRACT
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 鼠巨細(xì)胞病毒感染BALB/c小鼠模型的建立
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 趨化性細(xì)胞因子CCL28在感染CMV涎腺中的表達(dá)變化
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 頜下腺中CCL28表達(dá)與NF-κB關(guān)系的初步探討
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章
外文論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄭義敏,李安琪;嬰兒巨細(xì)胞病毒感染63例臨床分析[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2003年S2期

2 郭鳳云,劉淑英,張梅,陳維金,王玉梅,劉汝丹;高效價(jià)巨細(xì)胞病毒免疫球蛋白的制備及初步應(yīng)用[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;1995年03期

3 馬雅玲,張巍,王汝琪;宮內(nèi)巨細(xì)胞病毒感染對(duì)新生兒心肌的影響[J];新生兒科雜志;1998年03期

4 金黎明;楊艷;劉萬順;韓寶芹;田文杰;范圣第;;殼寡糖及其衍生物對(duì)CCl_4誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版);2007年07期

5 張翠,韓金祥,趙健,宋長(zhǎng)征,黃海南;一種簡(jiǎn)單快速制備CMV DNA擴(kuò)增模板的方法[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);2002年06期

6 羅光榮,范瑛,劉祖春;病毒性肝炎患者1055例中巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染的研究[J];臨床肝膽病雜志;1994年03期

7 朱一冰,潘世模;巨細(xì)胞病毒宮內(nèi)感染對(duì)新生兒心肌的影響[J];新生兒科雜志;2001年05期

8 鄭惠童,鄒紅梅,程冰梅,劉倩筠,高偉玲,黃翠玲;70例新生兒輸血及輸血制品后巨細(xì)胞病毒感染的調(diào)查[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2001年06期

9 商微,張彥,楊迎工,高英芳,梁云泰,王建平,范愛玲;PCR檢測(cè)胎死宮內(nèi)胎盤組織的弓形體及巨細(xì)胞病毒的研究[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2000年02期

10 趙樹銘,滕苗,李兵,成曉玲;亞甲基藍(lán)/光化學(xué)法滅活血漿巨細(xì)胞病毒的初步研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2003年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉國(guó)新;CCL28在感染CMV涎腺中的表達(dá)變化及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)途徑的初步探討[D];山東大學(xué);2013年

2 丁祥就;趨化因子CCL20對(duì)肝癌診斷和預(yù)后的價(jià)值研究[D];山東大學(xué);2012年

3 辛崇美;趨化性細(xì)胞因子CCL18對(duì)黑素瘤細(xì)胞系生物學(xué)行為影響的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

4 張友燦;降鈣素基因相關(guān)肽刺激角質(zhì)形成細(xì)胞分泌趨化因子CCL27及其機(jī)制的相關(guān)研究[D];山東大學(xué);2012年

5 王勇;CCL20基因修飾人角質(zhì)形成細(xì)胞的克隆篩選及相關(guān)干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

6 吳小津;造血干細(xì)胞移植后CMV感染的基因和免疫因素研究[D];蘇州大學(xué);2011年

7 車楠;SLE骨髓MSCs異常表達(dá)CCL2調(diào)控B細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

8 李杰;CCR9/CCL25途徑在小鼠皮膚移植急性排斥反應(yīng)中的作用機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2013年

9 謝曉亮;丹參病毒病原鑒定與脫病毒技術(shù)研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2008年

10 姜萍萍;涎腺局部調(diào)節(jié)由防齲疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答的研究[D];山東大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 高坡;趨化因子CCL2易化外周痛信號(hào)在脊髓的傳遞及其機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

2 胡銀秀;CCL20在膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠中的表達(dá)及抗CCL20對(duì)關(guān)節(jié)炎小鼠的治療作用[D];蘇州大學(xué);2012年

3 劉龍飛;豬胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子CCL17的趨化和鈣流功能研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

4 隨瑞枝;CCL5基因多態(tài)性與寧夏地區(qū)結(jié)核病遺傳易感性的關(guān)聯(lián)性研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2011年

5 李燕麗;豬CCL17基因的克隆與原核和真核表達(dá)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

6 凌銀嬋;改構(gòu)型酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)CCL_4誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

7 尹麗英;CCL19/CCR7在肺癌A549細(xì)胞中通過Sp1調(diào)控乙酰肝素酶表達(dá)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

8 覃佐東;CMV芭蕉分離物全基因組序列與侵染性克隆研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

9 蔣斌;宮頸病變中HPV16 E6/E7與CCL20及LC表達(dá)相關(guān)性研究[D];中南大學(xué);2012年

10 宋培培;dsRNA介導(dǎo)的煙草抗黃瓜花葉病毒（CMV）和馬鈴薯Y病毒（PVY）研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2878361