干細胞在牙周組織工程中的應(yīng)用越來越廣泛。但是,各種干細胞分別存在著取材不易、對機體損傷較大、體外培養(yǎng)困難等缺陷。牙齦成纖維細胞是一種成體干細胞,由于具有活躍的自身更新能力、取材方便、對機體損傷較小、體外培養(yǎng)成活率高等優(yōu)勢,具有一定的研究價值。本課題擬通過體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)牙齦成纖維細胞,檢測牙齦成纖維細胞的成骨分化能力。實驗一人牙齦成纖維細胞體外誘導(dǎo)成骨分化的實驗背景：牙周組織工程是修復(fù)因牙周炎導(dǎo)致的牙周組織缺損的研究熱點。牙齦成纖維細胞作為可能的牙周組織工程的種子細胞,越來越多地受到人們的關(guān)注。目的：人牙齦成纖維細胞(Gingival Fibroblasts, GFs)體外培養(yǎng),誘導(dǎo)其向成骨細胞方向分化,研究其成骨分化能力。方法：提取人GFs,傳代培養(yǎng)后進行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng),并檢測堿性磷酸酶及鈣結(jié)節(jié)。結(jié)果：與對照組比較,實驗組人GFs經(jīng)誘導(dǎo)后,出現(xiàn)堿性磷酸酶表達增強,并產(chǎn)生較多的鈣結(jié)節(jié)。結(jié)論：人GFs經(jīng)過體外培養(yǎng)及成骨誘導(dǎo)后,在牙周組織再生修復(fù)中有一定的應(yīng)用前景。實驗二利用可控的微納米圖案表面誘導(dǎo)人牙齦成纖維細胞向成骨樣細胞定向分化背景：生物材料表面圖案化在組織工程及細胞生物學(xué)等研究中具有十分重大的意義,也是研究材料表面與細胞間相互作用常用的方法之一。目的：研究微圖案的尺寸對人牙齦成纖維細胞行為的影響,證明圖案化表面能有效控制細胞的形貌。方法：在玻片表面制作高選擇性二維化學(xué)微圖案,將人牙齦成纖維細胞接種至兩種尺寸的微圖案表面,觀察細胞形態(tài)。結(jié)果：間距同樣是250μ m的情況下,90μm×90μm的微圖案,相比30μm×30μm的微圖案,更利于人牙齦成纖維細胞的生長和分化。結(jié)論：人牙齦成纖維細胞在小尺寸圖案中鋪展不好,而在大尺寸圖案中細胞鋪展良好。
【學(xué)位單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

純化的梭形細胞。??藍色為被Ｈｏｅｃｈｅｓｔ?３３３４２染色的細胞核，可觀察細胞的位置和數(shù)量。綠色為被抗??波形絲蛋白抗體染色呈陽性的細胞。（圖１Ａ）??藍色為被Ｈｏｅｃｈｅｓｔ?３３３４２染色的細胞核，可觀察細胞的位置和數(shù)量。未見綠色巧??光的陽性細胞，可見細胞角蛋白染色陰性。（圖巧）??經(jīng)免疫細胞化學(xué)染色，波形絲蛋白染色陽性，角蛋白染色陰性，其結(jié)果符合中胚??層來源的成纖維細胞的生物學(xué)特性，且未混雜上皮來源細胞。??１２??

Ｆｉｓｈｅｒ）。??１．?２表面高選擇性二維化學(xué)微圖案的制備及表征??在玻片表面制備細胞微圖案的步驟如圖５所示。首先在玻片表面制備抗蛋白吸附??的Ｐ０ＥＧＭＡ膜，后經(jīng)紫外照射，利用光掩模板在Ｐ０ＥＧＭＡ膜上制備抗蛋白吸附－促蛋白吸??附的二維化學(xué)微圖案。??Ｉ?Ｇｌａｓｓ?Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ??／ｉｉｇｈ－ｐ?巧巧?ｕｒ＾??■＇＇Ｖ．??＂?／１?咖！?＼?Ｖ?巧□?口?Ｊ??ＰＥＧＭＡ?＾?＾?＾?＾?＼?々畫；□巧??＾??＇一?＇＇＂ｎ?—Ｐ?＂鬥—－？ｒ?—??（３）?／￣＾?Ｗ??０?回＾??略化３?回回?《［）ｆｉｂ胃ｅｔｉ。??ＣＷ３?回［ｐ／??ＰＥＧＭＡ?，，??盡?Ｗ）化琴ＪＪ琴??ｒ?ｎ?＾—ｒ?ｎ??圖５表面細胞微圖案制備步驟示意圖。??玻片表面修飾Ｐ０ＥＧＭＡ分子的步驟如圖６所示。玻片的預(yù)處理采用強氧化劑氧化??法，步驟為，將玻片（直徑１２?ｍｍ）浸入ｐｉｒａｎｈａ溶液（９８％恥化與３０％巿〇２按３：１體??積比混合的溶液）中，于８０?－Ｃ水浴浸泡１小時，后用大量超純水沖洗，氮氣吹干并??于１２０?－Ｃ烘日分鐘。預(yù)處理后，在玻片表面形成哲基Ｗ進行后續(xù)反應(yīng)�？沟鞍孜降�??Ｐ０ＥＧＭＡ膜采用原子轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)法制備。首先，將預(yù)處理后的玻片置于１０％??ＡＰＴＥＳ的乙醇溶液中，室溫下反應(yīng)３０分鐘，反應(yīng)后用乙醇沖洗表面，氮氣吹干并于??１８??

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【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 何悅;張志愿;蔣欣泉;張秀麗;郭偉;;犬骨髓基質(zhì)細胞向成骨細胞誘導(dǎo)分化的實驗研究[J];口腔頜面外科雜志;2006年03期

本文編號：2877185