干細胞在牙周組織工程中的應用越來越廣泛。但是,各種干細胞分別存在著取材不易、對機體損傷較大、體外培養(yǎng)困難等缺陷。牙齦成纖維細胞是一種成體干細胞,由于具有活躍的自身更新能力、取材方便、對機體損傷較小、體外培養(yǎng)成活率高等優(yōu)勢,具有一定的研究價值。本課題擬通過體外培養(yǎng)及誘導牙齦成纖維細胞,檢測牙齦成纖維細胞的成骨分化能力。實驗一人牙齦成纖維細胞體外誘導成骨分化的實驗背景：牙周組織工程是修復因牙周炎導致的牙周組織缺損的研究熱點。牙齦成纖維細胞作為可能的牙周組織工程的種子細胞,越來越多地受到人們的關注。目的：人牙齦成纖維細胞(Gingival Fibroblasts, GFs)體外培養(yǎng),誘導其向成骨細胞方向分化,研究其成骨分化能力。方法：提取人GFs,傳代培養(yǎng)后進行成骨誘導培養(yǎng),并檢測堿性磷酸酶及鈣結節(jié)。結果：與對照組比較,實驗組人GFs經(jīng)誘導后,出現(xiàn)堿性磷酸酶表達增強,并產(chǎn)生較多的鈣結節(jié)。結論：人GFs經(jīng)過體外培養(yǎng)及成骨誘導后,在牙周組織再生修復中有一定的應用前景。實驗二利用可控的微納米圖案表面誘導人牙齦成纖維細胞向成骨樣細胞定向分化背景：生物材料表面圖案化在組織工程及細胞生物學等研究中具有十分重大的意義,也是研究材料表面與細胞間相互作用常用的方法之一。目的：研究微圖案的尺寸對人牙齦成纖維細胞行為的影響,證明圖案化表面能有效控制細胞的形貌。方法：在玻片表面制作高選擇性二維化學微圖案,將人牙齦成纖維細胞接種至兩種尺寸的微圖案表面,觀察細胞形態(tài)。結果：間距同樣是250μ m的情況下,90μm×90μm的微圖案,相比30μm×30μm的微圖案,更利于人牙齦成纖維細胞的生長和分化。結論：人牙齦成纖維細胞在小尺寸圖案中鋪展不好,而在大尺寸圖案中細胞鋪展良好。
【學位單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

純化的梭形細胞。??藍色為被Ｈｏｅｃｈｅｓｔ?３３３４２染色的細胞核，可觀察細胞的位置和數(shù)量。綠色為被抗??波形絲蛋白抗體染色呈陽性的細胞。（圖１Ａ）??藍色為被Ｈｏｅｃｈｅｓｔ?３３３４２染色的細胞核，可觀察細胞的位置和數(shù)量。未見綠色巧??光的陽性細胞，可見細胞角蛋白染色陰性。（圖巧）??經(jīng)免疫細胞化學染色，波形絲蛋白染色陽性，角蛋白染色陰性，其結果符合中胚??層來源的成纖維細胞的生物學特性，且未混雜上皮來源細胞。??１２??

Ｆｉｓｈｅｒ）。??１．?２表面高選擇性二維化學微圖案的制備及表征??在玻片表面制備細胞微圖案的步驟如圖５所示。首先在玻片表面制備抗蛋白吸附??的Ｐ０ＥＧＭＡ膜，后經(jīng)紫外照射，利用光掩模板在Ｐ０ＥＧＭＡ膜上制備抗蛋白吸附－促蛋白吸??附的二維化學微圖案。??Ｉ?Ｇｌａｓｓ?Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ??／ｉｉｇｈ－ｐ?巧巧?ｕｒ＾??■＇＇Ｖ．??＂?／１?咖！?＼?Ｖ?巧□?口?Ｊ??ＰＥＧＭＡ?＾?＾?＾?＾?＼?々畫；□巧??＾??＇一?＇＇＂ｎ?—Ｐ?＂鬥—－？ｒ?—??（３）?／￣＾?Ｗ??０?回＾??略化３?回回?《［）ｆｉｂ胃ｅｔｉ。??ＣＷ３?回［ｐ／??ＰＥＧＭＡ?，，??盡?Ｗ）化琴ＪＪ琴??ｒ?ｎ?＾—ｒ?ｎ??圖５表面細胞微圖案制備步驟示意圖。??玻片表面修飾Ｐ０ＥＧＭＡ分子的步驟如圖６所示。玻片的預處理采用強氧化劑氧化??法，步驟為，將玻片（直徑１２?ｍｍ）浸入ｐｉｒａｎｈａ溶液（９８％恥化與３０％巿〇２按３：１體??積比混合的溶液）中，于８０?－Ｃ水浴浸泡１小時，后用大量超純水沖洗，氮氣吹干并??于１２０?－Ｃ烘日分鐘。預處理后，在玻片表面形成哲基Ｗ進行后續(xù)反應�？沟鞍孜降�??Ｐ０ＥＧＭＡ膜采用原子轉移自由基聚合反應法制備。首先，將預處理后的玻片置于１０％??ＡＰＴＥＳ的乙醇溶液中，室溫下反應３０分鐘，反應后用乙醇沖洗表面，氮氣吹干并于??１８??

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【參考文獻】

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1 何悅;張志愿;蔣欣泉;張秀麗;郭偉;;犬骨髓基質細胞向成骨細胞誘導分化的實驗研究[J];口腔頜面外科雜志;2006年03期

本文編號：2877185