目的：乳牙齲是兒童口腔中的常見病和多發(fā)病,而齲病的發(fā)生主要與變異鏈球菌有關(guān)。變異鏈球菌產(chǎn)生的葡糖基轉(zhuǎn)移酶能利用蔗糖產(chǎn)生葡聚糖,在口腔細(xì)菌粘附和牙菌斑形成過(guò)程中起著非常重要的作用,被認(rèn)為是致齲菌最主要的致齲因子之一。本課題在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,從葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性方面,探討不同齲敏感兒童口腔變異鏈球菌臨床分離株不同基因型菌株在不同pH條件下的葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性的差異,分析其毒力因子在致齲過(guò)程中所起的作用,從而為完善乳牙齲危險(xiǎn)性預(yù)測(cè)方法及乳牙齲的預(yù)防提供有力的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：以前期實(shí)驗(yàn)獲得的具有不同基因核型的高齲,齲失補(bǔ)指數(shù)(decayed,missing, filled teeth index, dmft)≥6、中齲,6dmft≥4,無(wú)齲,dmft=0共111株變異鏈球菌中選取66株(包括23種基因型)為實(shí)驗(yàn)菌株,于牛心腦浸液(Brain Heart Infusion, BHI)平板復(fù)蘇,取典型菌落接種于胰蛋白酶水解物-酵母-L-半胱氨酸(Trypticase yeast L-cystine, TYC)培養(yǎng)基增菌24h,涂片檢查為純培養(yǎng)并生化鑒定后,配制相同濃度的(A540nm=1.0)各變異鏈球菌臨床分離株菌懸液,按菌液與TYC液體培養(yǎng)基1：10(v/v)的比例接種細(xì)菌,加入不同pH值(以0.5為間隔,pH5.0-7.0)的含0.25%葡萄糖和0.05% Tween 80的TYC培養(yǎng)基中,37℃厭氧(80%N2,10%H2,10%C02)培養(yǎng)18h,將細(xì)菌培養(yǎng)物離心(3300 r/min)20min。在上清液中加入固體硫酸銨達(dá)60%飽和度,4℃冰箱放置過(guò)夜,離心(10000r/min)30min收集沉淀。將沉淀物溶于含0.01%NaNO3的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(pH 6.4),置入透析袋(分子量100000)中,于相同磷酸鹽緩沖液透析48h,此即為粗酶制劑。粗酶制劑2.0ml加0.1ml 0.5mol/L磷酸鹽緩沖液,0.1ml 0.5mol/L蔗糖緩沖液,0.4ml重蒸水37℃孵育1h,加0.24mol/L HCL終止反應(yīng)。再加2.5ml重蒸水混勻,離心(2000 r/min)5min,以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn),上清液中的還原糖用Neson-Somogyi法測(cè)定。以空白組調(diào)零,于波長(zhǎng)620nm處讀取吸光度值A(chǔ)。酶的活力單位定為標(biāo)準(zhǔn)條件下(37℃反應(yīng)1h),每分鐘從蔗糖釋放1μmol/L還原糖所需的酶。結(jié)果：在pH中性條件下,高齲、中齲和無(wú)齲兒童口腔變異鏈球菌同一基因型菌株葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性存在差異：高齲組中齲組無(wú)齲組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；同一齲敏感兒童口腔變異鏈球菌不同基因型菌株葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性也有差異,其活性隨基因型的增加而增加,但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在pH5.0-7.0下,不同齲敏感兒童口腔變異鏈球菌不同基因型菌株葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性也存在差異：基因型越多的菌株葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性越高,但隨著pH值的降低,酶活性逐漸越低；當(dāng)pH5.5時(shí),酶活性普遍降低,但源于高齲兒童攜帶基因型數(shù)目越多的菌株葡糖基轉(zhuǎn)移酶仍具有較高活性。結(jié)論：中性條件下,不同齲敏感兒童口腔變異鏈球菌不同基因型臨床分離菌株葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性是存在差異的,齲敏感性越高,葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性越高,即葡糖基轉(zhuǎn)移酶的活性與變異鏈球菌的致齲力密切相關(guān)。不同齲敏感兒童口腔變異鏈球菌臨床分離菌株葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性與培養(yǎng)條件有關(guān),pH值越低,葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性越低。在不同pH條件下,攜帶基因型越多的菌株葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性越高,高齲兒童齲病的發(fā)生與變異鏈球菌的基因型有一定的相關(guān)性。
【學(xué)位單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R780.2
【部分圖文】：

異鏈球菌菌株在BHI培養(yǎng)基中復(fù)蘇48h后，面粗糙，突起，邊緣不齊hotoofStrePtoeoeeusmutansstrainsinB扭medursinanaerobieeondition.Morphologiealchangter，roughsurface，Milkyandtobeembed，Proee蘭氏染色

變異鏈球菌菌株在BHI培養(yǎng)基中復(fù)蘇48h后，表面粗糙，突起，邊緣不齊ePhotoofStrePtoeoeeusmutansstrainsinB扭mehoursinanaerobieeondition.Morphologiealchaneter，roughsurface，Milkyandtobeembed，Proe革蘭氏染色
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本文編號(hào)：2875764