目的通過使用正畸結(jié)扎鋼絲結(jié)扎SD大鼠右側(cè)上頜第一磨牙配合高糖飲食的方法建立牙周炎模型,對牙周炎模型動物給予辛伐他汀藥物治療,藥物治療后免疫組化檢測牙周組織中轉(zhuǎn)換生長因子-β、白細(xì)胞介素-1、腫瘤壞死因子-α的表達(dá),進(jìn)而探討辛伐他汀對牙周炎炎癥反應(yīng)以及骨改建的影響,為臨床上牙周炎患者的治療提供實驗基礎(chǔ)。方法60只2個月齡健康SD雄性大鼠,體重達(dá)(220±20)g,清潔級,普通飼料喂養(yǎng),動物自由飲水和攝食。適應(yīng)性飼養(yǎng)后,第1章采用簡單隨機(jī)化分組法將30只動物平均分為三組,每組10只。實驗組M1組:結(jié)扎牙齒,高糖飲食。陰性對照組M2組:不結(jié)扎牙齒,高糖飲食�？瞻讓φ战MM3組:不結(jié)扎牙齒,正常飲食;實驗周期為8周。在整個實驗周期中每周監(jiān)測大鼠體重的變化,于第8周末檢測大鼠右側(cè)上頜第一磨牙的牙周袋深度、牙齦指數(shù)、牙松動度、牙槽骨吸收量四項牙周炎臨床常見檢測指標(biāo)。8周末動物處死后采集牙及牙周組織標(biāo)本制成切片進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。第2章將30只SD大鼠按照第1章的方法建立牙周炎模型后隨機(jī)分為三組,N1組:辛伐他汀用藥組,N2組:生理鹽水組,N3組:空白對照組。每組10只,恒溫飼養(yǎng)。于8周末處死動物,截取右側(cè)上頜第一磨牙區(qū)的牙及牙周組織,免疫組化觀察牙周組織中轉(zhuǎn)換生長因子-β,白細(xì)胞介素-1,腫瘤壞死因子-α的表達(dá)量,用IPP6.0軟件對三種因子陽性表達(dá)區(qū)的平均光密度值進(jìn)行圖像分析,其結(jié)果用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果1 M2、M3兩個對照組大鼠的體重持續(xù)增加,而M1實驗組大鼠體重先減少后增加,與兩對照組相比,體重變化有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2 M2、M3兩個對照組大鼠牙齦指數(shù),牙松動度,牙槽骨吸收量的指標(biāo)分值與正常健康大鼠相比未發(fā)生改變,而M1實驗組大鼠的三項指標(biāo)均發(fā)生改變,并且與M2、M3兩個對照組相比,M1實驗組大鼠的牙周袋深度加深,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3大鼠右側(cè)上頜第一磨牙區(qū)牙周組織HE染色結(jié)果:M1實驗組上皮向結(jié)締組織增生呈網(wǎng)眼狀,其周圍可見炎癥細(xì)胞浸潤,血管擴(kuò)張充血,牙周膠原纖維水解,牙槽骨吸收呈現(xiàn)為疏松網(wǎng)狀,符合牙周炎病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn);而M2、M3兩個對照組符合正常牙周的組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。4辛伐他汀治療后,大鼠右側(cè)上頜第一磨牙區(qū)牙周組織免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示:N1實驗組牙周組織中轉(zhuǎn)換生長因子-β的表達(dá)量高于N2、N3兩對照組,而白細(xì)胞介素-1、腫瘤壞死因子-α的表達(dá)量低于兩對照組。結(jié)論1實驗證明通過鋼絲結(jié)扎配合高糖飲食法,8周可成功建立SD大鼠的牙周炎動物模型。2實驗證明了辛伐他汀可以促進(jìn)牙周組織中轉(zhuǎn)換生長因子-β的表達(dá),同時抑制白細(xì)胞介素-1和腫瘤壞死因子-α的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R781.42
【部分圖文】：

3.5ml/kg 的劑量對 M1組大鼠進(jìn)行腹腔注射的全身麻醉，大約 5-10 分鐘麻醉起效后，將大鼠固定于實驗臺面的平板上（見圖 1），用牙齦分離器剝離大鼠右側(cè)上頜第一磨牙的牙齦組織，目的是通過剝離牙齦的局部刺激造成牙齦組織的炎性水腫，從而便于對牙齒的結(jié)扎操作。剝離操作每天進(jìn)行一次，持續(xù)兩天，且兩天剝離的時間保持一致。第三天采用 0.2mm 正畸結(jié)扎鋼絲牢固結(jié)扎大鼠右側(cè)上頜第一磨牙的牙頸部（見圖 2），然后將多余長度的結(jié)扎絲減掉，使結(jié)扎絲斷端壓入到齦溝內(nèi)并使其盡量向牙根方向靠近。每周用上述同樣的麻醉方法及操作步驟對牙齒進(jìn)行重新結(jié)扎，保證結(jié)扎絲的長期穩(wěn)固存在，并在 8 周的實驗周期中予以 10%的白砂糖水以及白砂糖浸泡的軟飼料喂食。（2）M2組：不剝離牙齦，不結(jié)扎牙齒，只在實驗期間予以 10%的白砂糖水及白砂糖浸泡的軟飼料喂食，連續(xù)飼養(yǎng) 8 周。（3）M3組：不剝離牙齦，不結(jié)扎牙齒，普通飼料喂養(yǎng)，純水飲用。連續(xù)飼養(yǎng)8 周。

3.5ml/kg 的劑量對 M1組大鼠進(jìn)行腹腔注射的全身麻醉，大約 5-10 分鐘麻醉起效后，將大鼠固定于實驗臺面的平板上（見圖 1），用牙齦分離器剝離大鼠右側(cè)上頜第一磨牙的牙齦組織，目的是通過剝離牙齦的局部刺激造成牙齦組織的炎性水腫，從而便于對牙齒的結(jié)扎操作。剝離操作每天進(jìn)行一次，持續(xù)兩天，且兩天剝離的時間保持一致。第三天采用 0.2mm 正畸結(jié)扎鋼絲牢固結(jié)扎大鼠右側(cè)上頜第一磨牙的牙頸部（見圖 2），然后將多余長度的結(jié)扎絲減掉，使結(jié)扎絲斷端壓入到齦溝內(nèi)并使其盡量向牙根方向靠近。每周用上述同樣的麻醉方法及操作步驟對牙齒進(jìn)行重新結(jié)扎，保證結(jié)扎絲的長期穩(wěn)固存在，并在 8 周的實驗周期中予以 10%的白砂糖水以及白砂糖浸泡的軟飼料喂食。（2）M2組：不剝離牙齦，不結(jié)扎牙齒，只在實驗期間予以 10%的白砂糖水及白砂糖浸泡的軟飼料喂食，連續(xù)飼養(yǎng) 8 周。（3）M3組：不剝離牙齦，不結(jié)扎牙齒，普通飼料喂養(yǎng)，純水飲用。連續(xù)飼養(yǎng)8 周。

5）各組大鼠右側(cè)磨牙段標(biāo)本的采集（1）標(biāo)本采集：將各組 SD 大鼠麻醉處死后，為了便于截取檢測的組織標(biāo)本，首先用手術(shù)剪將大鼠的兩側(cè)口角分別剪開，擴(kuò)大操作視野，分離出大鼠完整的上頜骨骨組織后截取右側(cè)上頜第一磨牙區(qū)段作為組織標(biāo)本（見圖 3）。（2）各組大鼠右側(cè)上頜第一磨牙牙槽骨吸收量的測量：按上述標(biāo)本采集的方法取組織標(biāo)本，并將附著于右側(cè)上頜第一磨牙區(qū)段骨組織上的牙齦以及骨膜剔除干凈，測量右側(cè)上頜第一磨牙釉牙骨質(zhì)界到牙槽嵴頂之間的距離，每顆牙分別選取近中頰側(cè)、頰側(cè)中央、遠(yuǎn)中頰側(cè)、近中舌側(cè)、舌側(cè)中央、遠(yuǎn)中舌側(cè)六個位點(diǎn)進(jìn)行測量，所測數(shù)值取平均值作為該牙牙槽骨吸收量的平均分值。6）各組大鼠右側(cè)上頜第一磨牙區(qū)段標(biāo)本的制備（1）標(biāo)本的固定：將采集好、修剪好的組織標(biāo)本置于含有 4%溶液濃度、PH值為 7.2-7.4 的多聚甲醛溶液的玻璃容器中固定 24 小時（見圖 4），并放在 4℃恒溫冰箱內(nèi)儲存。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2872796