發(fā)布時間：2020-11-04 23:06

　　 目的分離培養(yǎng)人牙髓細胞,探討其基本的增殖、分化等生物學(xué)特性,通過利用電容耦合電刺激牙髓細胞,研究其對體外培養(yǎng)人牙髓細胞增殖的影響,以探索利用微電流環(huán)境在牙組織工程中應(yīng)用的前景。 方法從正畸減數(shù)拔除的年輕恒前磨牙中分離、培養(yǎng)牙髓細胞,傳代三代至八代的細胞用于生物學(xué)特性試驗研究:1、利用相差顯微鏡觀察系細胞的一般形態(tài). 2、記錄細胞的生長曲線. 3、流式細胞術(shù)檢測其表面分子的表達. 4、誘導(dǎo)礦化,通過免疫組化及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)等鑒定其誘導(dǎo)分化的結(jié)果。在生物學(xué)研究的基礎(chǔ)上,對體外培養(yǎng)的人牙髓細胞施加場強30V/cm ,頻率分別為5、25、50、75、100KHz的電容耦合電刺激,30min/d,連續(xù)作用4d,觀察不同頻率電容耦合電刺激對人牙髓細胞體外增殖作用的影響,對照組正常狀態(tài)培養(yǎng),從以下方面檢測電容耦合電刺激對人牙髓細胞增殖的影響: 1、倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)改變. 2、MTT法檢測細胞活性及增殖情況. 3、流式細胞儀測定細胞期。 結(jié)果本實驗中人牙髓細胞在體外可多次傳代培養(yǎng)而保持旺盛的生長狀態(tài),其生長曲線在8-10天達到平穩(wěn),流式細胞術(shù)結(jié)果顯示,CD44、CD90、CD147均為陽性,這與間充質(zhì)干細胞的免疫表型相一致。經(jīng)礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)后,免疫組化結(jié)果顯示牙本質(zhì)涎蛋白染色陽性,茜素紅染色有礦化結(jié)節(jié)形成以及堿磷酶表達升高,RT-PCR,DSPP表達陽性。經(jīng)電容耦合電刺激后結(jié)果顯示:1、不同頻率的電刺激作用后細胞形態(tài)和對照組無明顯差別。2、MTT檢測顯示經(jīng)電容耦合電刺激后的人牙髓細胞增殖能力和對照組明顯不同,其中50Hz刺激組生長曲線最高,明顯快于其他頻率刺激組(P0.01)。3、流式細胞儀檢測表明,經(jīng)電容耦合電刺激作用以后,所有樣本均未發(fā)現(xiàn)有DNA倍體異常的細胞(diploid:100%);人牙髓細胞細胞周期發(fā)生了改變,S期細胞百分比和刺激頻率有關(guān)。 結(jié)論本實驗從人年輕恒牙獲得的人牙髓細胞易于分離培養(yǎng),細胞狀態(tài)較原始,具有干細胞特性,經(jīng)誘導(dǎo)可分化為成牙本質(zhì)細胞,提示其具有作為牙組織工程種子細胞的潛能。頻率是影響電容耦合電刺激細胞生物學(xué)效應(yīng)的重要因素之一,頻率不同,其產(chǎn)生的促細胞增殖效應(yīng)不一,50kHz可能是促進人牙髓細胞體外增殖的適合頻率。
【學(xué)位單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

表 2 流式細胞儀檢測不同頻率刺激后人牙髓細胞的細胞周期組別細胞周期（%）G1 S G2 對照組5KHZ25KHZ50KHZ**75KHZ100KHZ79.0873.7476.4271.7273.6579.0815.7818.9422.9723.6021.1813.445.137.593.602.757.115.13N＞10000，各實驗組與對照組相比較 P＜0.05，**表示 P＜0.01

53圖11 茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色陽性×100 圖12 經(jīng)誘導(dǎo)人牙髓細胞 DSP 染色陽性×200圖13RT-PCR 結(jié)果圖 圖14 電刺激培養(yǎng)裝置圖圖15 對照組 圖16 電刺激組ALP活性0204060

53圖11 茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色陽性×100 圖12 經(jīng)誘導(dǎo)人牙髓細胞 DSP 染色陽性×200圖13RT-PCR 結(jié)果圖 圖14 電刺激培養(yǎng)裝置圖圖15 對照組 圖16 電刺激組ALP活性020406080100120140融和前 融?
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉俊,李玉晶;應(yīng)用不同方法進行人牙髓細胞原代培養(yǎng)的比較研究[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2005年03期

2 楊柳,段小軍,戴剛,唐康來,譚祖鍵,周強,李起鴻;人間充質(zhì)干細胞體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)及其生物學(xué)特性變化[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年05期

3 胡靜;譚穎徽;何飛;張萍;;IGF-1、bFGF對人牙髓干細胞的體外誘導(dǎo)分化的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年08期

4 吳鶯,凌均棨;牙髓干細胞分化為成牙本質(zhì)細胞相關(guān)標記物的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;2005年06期

5 何飛,譚穎徽,張綱;人牙髓干細胞的體外培養(yǎng)和鑒定[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

6 王前,鄭磊;電刺激促進成骨細胞粘附特性的實驗研究[J];暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2000年01期

7 張鋒;鄧旭亮;梅芳;王新知;;空間微重力環(huán)境對人牙髓間充質(zhì)細胞的影響初探[J];科技導(dǎo)報;2007年02期

8 陳柯,任煜光,劉桂萍,臧燕;脈沖Nd:YAG激光照射對牙髓細胞增殖的影響[J];口腔醫(yī)學(xué)縱橫;1998年03期

9 聶敏,邊專,樊明文,趙心臣,Mikael Wendel;雙向電泳分析維生素D對牙髓細胞分化的影響[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2005年04期

10 賀慧霞,金巖,史俊南,劉源,王亦菁,周澤淵,王新文;人牙髓干細胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2004年09期

本文編號：2870742