目的 體外培養(yǎng)用差速貼壁法和有限稀釋法純化的大鼠牙囊細(xì)胞,并觀察其生物學(xué)特性,為將之用作口腔組織工程的種子細(xì)胞奠定基礎(chǔ)。 方法 體式顯微鏡下準(zhǔn)確分離7d齡SD大鼠第一磨牙牙囊組織,用酶消化法、有限稀釋法和差速貼壁法進(jìn)行培養(yǎng)和純化細(xì)胞,取第三代細(xì)胞分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):1、克隆形成實(shí)驗(yàn);2、流式細(xì)胞儀鑒定DFCs表面抗原分子表達(dá),并與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面相關(guān)因子表達(dá)情況進(jìn)行對(duì)比;3、骨向誘導(dǎo)、成脂誘導(dǎo)、成神經(jīng)誘導(dǎo)及相關(guān)免疫組織化學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn);4、培養(yǎng)同批動(dòng)物來(lái)源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和牙囊細(xì)胞,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)兩者成骨、成脂、成神經(jīng)誘導(dǎo)前后相關(guān)基因的改變。 結(jié)果 1、差速貼壁法和有限稀釋法純化培養(yǎng)的大鼠牙囊細(xì)胞多數(shù)呈長(zhǎng)梭形,部分呈三角形,細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)異質(zhì)性,克隆形成能力增強(qiáng)(5.25±0.64)%。2、流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示所獲得的牙囊干細(xì)胞表面分子CD29、CD90、CD146陽(yáng)性率分別為95.6%、98.6%、31.1%,而CD31、CD45的陽(yáng)性率僅為1.6%、4.2%。3、成骨誘導(dǎo)后,茜素紅染色呈陽(yáng)性,ALP染色顯示ALP表達(dá)增強(qiáng)明顯;成脂誘導(dǎo)后細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)明顯脂滴,油紅O染色呈陽(yáng)性;成神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,神經(jīng)微管蛋白染色呈陽(yáng)性。4、DFCs與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)相比,相同條件誘導(dǎo)后COL-1、DMP、OCN、BSP基因表達(dá)明顯增高,而COL-3、ON表達(dá)較低。 結(jié)論 體外培養(yǎng)的大鼠牙囊細(xì)胞具有較強(qiáng)的克隆形成能力和多向分化潛能,結(jié)合其細(xì)胞異質(zhì)性以及細(xì)胞表面特異性抗原分子表達(dá)結(jié)果,提示大鼠牙囊細(xì)胞具有牙周乃至口腔組織工程理想種子細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ),可作為口腔組織工程理想的種子細(xì)胞。
【學(xué)位單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類(lèi)】：R780.2
【部分圖文】：

有限稀釋法培養(yǎng)的牙囊細(xì)胞

克隆形成實(shí)驗(yàn)（5.25±0.64）%

22圖 2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面分子注：2a FITC 對(duì)照 0.8%；2C PE 對(duì)照 1.1%CD29 95.6%；CD31 1.6%；CD45 4.2%；CD90 98.6%；CD146 31.1%
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2870056