目的 體外培養(yǎng)用差速貼壁法和有限稀釋法純化的大鼠牙囊細胞,并觀察其生物學特性,為將之用作口腔組織工程的種子細胞奠定基礎。 方法 體式顯微鏡下準確分離7d齡SD大鼠第一磨牙牙囊組織,用酶消化法、有限稀釋法和差速貼壁法進行培養(yǎng)和純化細胞,取第三代細胞分別進行以下實驗:1、克隆形成實驗;2、流式細胞儀鑒定DFCs表面抗原分子表達,并與骨髓間充質干細胞表面相關因子表達情況進行對比;3、骨向誘導、成脂誘導、成神經誘導及相關免疫組織化學檢測實驗;4、培養(yǎng)同批動物來源的骨髓間充質干細胞和牙囊細胞,應用實時定量PCR檢測兩者成骨、成脂、成神經誘導前后相關基因的改變。 結果 1、差速貼壁法和有限稀釋法純化培養(yǎng)的大鼠牙囊細胞多數(shù)呈長梭形,部分呈三角形,細胞形態(tài)呈現(xiàn)異質性,克隆形成能力增強(5.25±0.64)%。2、流式細胞儀檢測結果顯示所獲得的牙囊干細胞表面分子CD29、CD90、CD146陽性率分別為95.6%、98.6%、31.1%,而CD31、CD45的陽性率僅為1.6%、4.2%。3、成骨誘導后,茜素紅染色呈陽性,ALP染色顯示ALP表達增強明顯;成脂誘導后細胞胞漿內可見明顯脂滴,油紅O染色呈陽性;成神經細胞誘導后細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,神經微管蛋白染色呈陽性。4、DFCs與骨髓間充質干細胞(BMMSCs)相比,相同條件誘導后COL-1、DMP、OCN、BSP基因表達明顯增高,而COL-3、ON表達較低。 結論 體外培養(yǎng)的大鼠牙囊細胞具有較強的克隆形成能力和多向分化潛能,結合其細胞異質性以及細胞表面特異性抗原分子表達結果,提示大鼠牙囊細胞具有牙周乃至口腔組織工程理想種子細胞的細胞學基礎,可作為口腔組織工程理想的種子細胞。
【學位單位】：遼寧醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2011
【中圖分類】：R780.2
【部分圖文】：

有限稀釋法培養(yǎng)的牙囊細胞

克隆形成實驗（5.25±0.64）%

22圖 2.流式細胞儀檢測細胞表面分子注：2a FITC 對照 0.8%；2C PE 對照 1.1%CD29 95.6%；CD31 1.6%；CD45 4.2%；CD90 98.6%；CD146 31.1%
【參考文獻】

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本文編號：2870056