目的：本研究通過抗-EMMPRIN單克隆抗體、基質金屬蛋白酶抑制劑多西環(huán)素及抗-EMMPRIN單克隆抗體與多西環(huán)素聯(lián)合應用分別觀察對人舌鱗癌Tca8113細胞及裸鼠移植瘤的抑制作用,從而探索阻斷腫瘤侵襲的機制,為治療口腔鱗癌尋找新途徑。 方法： 1.MTT法(四甲基偶氮唑藍法)：通過加入藥物抗-EMMPRIN單克隆抗體、多西環(huán)素、抗-EMMPRIN單克隆抗體與多西環(huán)素聯(lián)合用藥,觀察三種藥物對舌鱗癌Tca8113細胞的增殖抑制作用； 2.構建裸鼠Yca8113細胞皮下移植瘤動物模型：通過于裸鼠右腋皮下注射1×106個混勻的Tca8113細胞,觀察成瘤情況。成瘤兩周后隨機分為4組,每組8只,分別為對照組(生理鹽水,0.1ml/d)、抗-EMMPRIN單克隆抗體組(10mg/kg/d)、多西環(huán)素組(20mg/ml/3d)、抗-EMMPRIN單克隆抗體(10mg/kg/d)+多西環(huán)素(20mg/ml/3d)。開始給藥后每隔3天稱重裸鼠,游標卡尺測量腫瘤結節(jié)的長短直徑。4周后處死,連同包膜完整剝離腫瘤組織,稱重。根據(jù)腫瘤體積計算抑瘤率 3.免疫組織化學法(SP法)檢測蛋白表達：采用SP法檢測各組裸鼠腫瘤組織內CD147及MMP-2, MMP-9蛋白表達。CD147陽性信號定位于細胞膜和細胞漿,MMP-2陽性信號定位于細胞膜和細胞漿,MMP-9陽性信號定位于細胞質和細胞膜,成棕黃色顆粒。每張切片隨機選取4個高倍視野,計數(shù)癌細胞中陽性細胞數(shù),分別按以下比例分級：0級為無明顯陽性反應細胞；1級為陽性細胞10%、弱染色；2級為陽性細胞10%-50%；3級為陽性細胞50%、強染色。0-1級判為陰性表達；2-3級判為陽性表達。 結果： 1.細胞增殖抑制實驗結果：抗-EMMPRIN單克隆抗體及多西環(huán)素聯(lián)合用藥24h、48h、72h對Tca8113細胞的增殖抑制作用強于單獨使用抗-EMMPRIN單克隆抗體和多西環(huán)素；單獨使用抗-EMMPRIN單克隆抗體對細胞的增殖抑制作用強于單獨使用多西環(huán)素,P0.05,結果具有統(tǒng)計學差異。 2.瘤體重量及抑瘤率結果：對照組、多西環(huán)素組、抗-EMMPRIN單克隆抗體組及聯(lián)合用藥組瘤體重量分別為1.12±0.31g、0.86±0.11g、0.74±0.19g及0.55±0.17g。對照組與實驗組之間差別有顯著差別(P0.01),聯(lián)合用藥與單純用藥組之間比較有差別(P0.05)。各組腫瘤體積變化：對照組瘤體變化大,而三個實驗組變化較小。對照組與實驗組之間有顯著差別(P0.01),聯(lián)合用藥組較抗-EMMPRIN單克隆抗體組和多西環(huán)素組變化最小,P0.05,結果具有統(tǒng)計學差異；抗-EMMPRIN單克隆抗體組和多西環(huán)素組之間無明顯差異(P0.05)。抗-EMMPRIN單克隆抗體組、多西環(huán)素組及聯(lián)合用藥組抑瘤率分別為37.58%、34.28%及40.35%。 3.CD147及MMP-2, MMP-9蛋白表達：對照組CD147蛋白陽性表達率為100%.MMP-2蛋白陽性表達率為100%,MMP-9蛋白陽性表達率為100%�？�-EMMPRIN單克隆抗體組CD147蛋白陽性表達率為25%, MMP-2蛋白陽性表達率為12.5%,MMP-9蛋白陽性表達率為12.5%。多西環(huán)素組CD147蛋白陽性表達率為50%,MMP-2蛋白陽性表達率為50%,MMP-9蛋白陽性表達率為50%。聯(lián)合用藥組CD147蛋白陽性表達率為12.5%,MMP-2蛋白陽性表達率為12.5%,MMP-9蛋白陽性表達率為12.5%。 結論： 1.抗-EMMPRIN單克隆抗體及多西環(huán)素均能夠抑制Tca8113細胞增殖及裸鼠舌鱗癌移植瘤的生長,二者聯(lián)合抑制效果更強。 2.抗-EMMPRIN單克隆抗體及多西環(huán)素均能夠降低裸鼠舌鱗癌移植瘤內CD147及MMP-2, MMP-9蛋白表達,二者聯(lián)合用藥后CD147及MMP-2, MMP-9蛋白的表達更弱。CD147蛋白表達下調,則MMP-2, MMP-9蛋白表達亦下調。
【學位單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2012
【中圖分類】：R739.86
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本文編號：2869991