目的：本研究通過抗-EMMPRIN單克隆抗體、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑多西環(huán)素及抗-EMMPRIN單克隆抗體與多西環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用分別觀察對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞及裸鼠移植瘤的抑制作用,從而探索阻斷腫瘤侵襲的機(jī)制,為治療口腔鱗癌尋找新途徑。 方法： 1.MTT法(四甲基偶氮唑藍(lán)法)：通過加入藥物抗-EMMPRIN單克隆抗體、多西環(huán)素、抗-EMMPRIN單克隆抗體與多西環(huán)素聯(lián)合用藥,觀察三種藥物對(duì)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖抑制作用； 2.構(gòu)建裸鼠Yca8113細(xì)胞皮下移植瘤動(dòng)物模型：通過于裸鼠右腋皮下注射1×106個(gè)混勻的Tca8113細(xì)胞,觀察成瘤情況。成瘤兩周后隨機(jī)分為4組,每組8只,分別為對(duì)照組(生理鹽水,0.1ml/d)、抗-EMMPRIN單克隆抗體組(10mg/kg/d)、多西環(huán)素組(20mg/ml/3d)、抗-EMMPRIN單克隆抗體(10mg/kg/d)+多西環(huán)素(20mg/ml/3d)。開始給藥后每隔3天稱重裸鼠,游標(biāo)卡尺測量腫瘤結(jié)節(jié)的長短直徑。4周后處死,連同包膜完整剝離腫瘤組織,稱重。根據(jù)腫瘤體積計(jì)算抑瘤率 3.免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測蛋白表達(dá)：采用SP法檢測各組裸鼠腫瘤組織內(nèi)CD147及MMP-2, MMP-9蛋白表達(dá)。CD147陽性信號(hào)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,MMP-2陽性信號(hào)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,MMP-9陽性信號(hào)定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜,成棕黃色顆粒。每張切片隨機(jī)選取4個(gè)高倍視野,計(jì)數(shù)癌細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù),分別按以下比例分級(jí)：0級(jí)為無明顯陽性反應(yīng)細(xì)胞；1級(jí)為陽性細(xì)胞10%、弱染色；2級(jí)為陽性細(xì)胞10%-50%；3級(jí)為陽性細(xì)胞50%、強(qiáng)染色。0-1級(jí)判為陰性表達(dá)；2-3級(jí)判為陽性表達(dá)。 結(jié)果： 1.細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果：抗-EMMPRIN單克隆抗體及多西環(huán)素聯(lián)合用藥24h、48h、72h對(duì)Tca8113細(xì)胞的增殖抑制作用強(qiáng)于單獨(dú)使用抗-EMMPRIN單克隆抗體和多西環(huán)素；單獨(dú)使用抗-EMMPRIN單克隆抗體對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用強(qiáng)于單獨(dú)使用多西環(huán)素,P0.05,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.瘤體重量及抑瘤率結(jié)果：對(duì)照組、多西環(huán)素組、抗-EMMPRIN單克隆抗體組及聯(lián)合用藥組瘤體重量分別為1.12±0.31g、0.86±0.11g、0.74±0.19g及0.55±0.17g。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組之間差別有顯著差別(P0.01),聯(lián)合用藥與單純用藥組之間比較有差別(P0.05)。各組腫瘤體積變化：對(duì)照組瘤體變化大,而三個(gè)實(shí)驗(yàn)組變化較小。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組之間有顯著差別(P0.01),聯(lián)合用藥組較抗-EMMPRIN單克隆抗體組和多西環(huán)素組變化最小,P0.05,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；抗-EMMPRIN單克隆抗體組和多西環(huán)素組之間無明顯差異(P0.05)�？�-EMMPRIN單克隆抗體組、多西環(huán)素組及聯(lián)合用藥組抑瘤率分別為37.58%、34.28%及40.35%。 3.CD147及MMP-2, MMP-9蛋白表達(dá)：對(duì)照組CD147蛋白陽性表達(dá)率為100%.MMP-2蛋白陽性表達(dá)率為100%,MMP-9蛋白陽性表達(dá)率為100%。抗-EMMPRIN單克隆抗體組CD147蛋白陽性表達(dá)率為25%, MMP-2蛋白陽性表達(dá)率為12.5%,MMP-9蛋白陽性表達(dá)率為12.5%。多西環(huán)素組CD147蛋白陽性表達(dá)率為50%,MMP-2蛋白陽性表達(dá)率為50%,MMP-9蛋白陽性表達(dá)率為50%。聯(lián)合用藥組CD147蛋白陽性表達(dá)率為12.5%,MMP-2蛋白陽性表達(dá)率為12.5%,MMP-9蛋白陽性表達(dá)率為12.5%。 結(jié)論： 1.抗-EMMPRIN單克隆抗體及多西環(huán)素均能夠抑制Tca8113細(xì)胞增殖及裸鼠舌鱗癌移植瘤的生長,二者聯(lián)合抑制效果更強(qiáng)。 2.抗-EMMPRIN單克隆抗體及多西環(huán)素均能夠降低裸鼠舌鱗癌移植瘤內(nèi)CD147及MMP-2, MMP-9蛋白表達(dá),二者聯(lián)合用藥后CD147及MMP-2, MMP-9蛋白的表達(dá)更弱。CD147蛋白表達(dá)下調(diào),則MMP-2, MMP-9蛋白表達(dá)亦下調(diào)。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R739.86
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文縮略表
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材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
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本文編號(hào)：2869991