發(fā)布時(shí)間：2020-11-03 09:33

　　 目的: 口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)是指“口腔粘膜上以白色病變?yōu)橹鞯膿p害,不具有其他任何可定義的損害特征;一部分口腔白斑可轉(zhuǎn)化為癌”。OLK屬于癌前病變,有轉(zhuǎn)化為口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的潛能,其主要病理改變是上皮異常增生。研究表明有4%-40%的病人會(huì)發(fā)生癌變,其轉(zhuǎn)化為口腔鱗狀細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)比正常人高50到100倍。其轉(zhuǎn)化是一個(gè)受多因素影響的多階段、多步驟的復(fù)雜過(guò)程,口腔鱗狀細(xì)胞癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤。KGF(keratinocyte growth factor)一般由間充質(zhì)源性細(xì)胞分泌,上皮細(xì)胞表達(dá)其相應(yīng)的受體——KGFR(Keratinocyte growth factor receptor)。Bcl-2(B-CellLymphoma/Leukemia 2)基因是一種原癌基因,是最早被認(rèn)識(shí)的抗凋亡基因。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮一定作用,最近的研究證實(shí)了KGF具有抑制上皮細(xì)胞凋亡的生物學(xué)作用,并且KGFR與Bcl-2的共表達(dá)無(wú)論在細(xì)胞水平還是在組織水平都有非常緊密的聯(lián)系。課題組前期實(shí)驗(yàn)研究表明,KGF mRNA及蛋白在正�？谇徽衬そM、OLK組及OSCC組的上皮細(xì)胞和結(jié)締組織中的表達(dá)分別依次增加。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化技術(shù)檢測(cè)正�？谇徽衬�、OLK、OSCC組織中KGFR,Bcl-2蛋白的表達(dá),以研究其在三種不同組織中的變化規(guī)律,探討其在癌變過(guò)程中與細(xì)胞凋亡的聯(lián)系及意義,為臨床上阻斷白斑的癌變以及預(yù)防、治療OLK和OSCC提供新的思路。 方法: 1.收集臨床及病理確診的口腔正常粘膜、OLK及OSCC標(biāo)本共25例,將每個(gè)標(biāo)本的連續(xù)切片分別進(jìn)行HE染色、KGFR及Bcl-2免疫組化分析和陰性對(duì)照,根據(jù)免疫組化結(jié)果從蛋白水平觀察KGFR、Bcl-2在不同組織中的表達(dá)情況。 2.對(duì)免疫組化的結(jié)果進(jìn)行圖像分析:切片輸入圖像分析系統(tǒng),對(duì)表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析。每張切片計(jì)算5個(gè)高倍視野下總陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),并取其均數(shù);同時(shí)自切片染色的中心區(qū)域上下左右各選擇相同面積有代表性的區(qū)域,檢測(cè)平均光密度(optical density,OD)。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析圖像系統(tǒng)分析KGFR,Bcl-2蛋白光密度值,結(jié)果以均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)描述。顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析,組間比較采用q檢驗(yàn)。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1.KGFR免疫組化結(jié)果顯示:在正�？谇徽衬ぶ�,KGFR在上皮細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)主要位于棘層及顆粒層細(xì)胞胞膜和部分胞質(zhì)中,其染色略淺。在OLK組織中,KGFR在全層上皮細(xì)胞胞膜、部分細(xì)胞胞質(zhì)中陽(yáng)性表達(dá),在顆粒層的表達(dá)最強(qiáng),呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),其次為棘層,其染色較正常粘膜的上皮細(xì)胞染色要深。在OSCC組織中,KGFR在全層上皮島細(xì)胞胞膜、細(xì)胞胞質(zhì)和角化珠中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。染色程度較OLK組增強(qiáng)。 2.Bcl-2免疫組化結(jié)果顯示:在正�？谇徽衬ぶ�,Bcl-2在上皮細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)主要位于基底層細(xì)胞的胞質(zhì)和核膜。在OLK組織中,Bcl-2在上皮細(xì)胞的表達(dá)與在正�？谇徽衬ど掀ぜ�(xì)胞中的表達(dá)相似,但其染色較正常粘膜的上皮細(xì)胞染色要深。在OSCC組織中,Bcl-2在全層上皮細(xì)胞胞質(zhì)和核膜中陽(yáng)性表達(dá),在基底層的表達(dá)最強(qiáng),其余各層表達(dá)較弱。染色程度較OLK組增強(qiáng)。 3.免疫組化平均光密度(OD)檢測(cè):正�？谇徽衬そM、OLK組及OSCC組中的KGFR和Bcl-2平均光密度依次增加,組間兩兩比較均有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論: KGFR與Bcl-2蛋白在正�？谇徽衬そM、OLK組及OSCC組的表達(dá)分別依次增加。課題組前期實(shí)驗(yàn)研究表明,KGF mRNA及蛋白在正�？谇徽衬そM、OLK組及OSCC組的上皮細(xì)胞和結(jié)締組織中的表達(dá)分別依次增加。提示KGF及KGFR在口腔白斑癌變的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮一定的作用——不僅可以促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖和分化還有可能通過(guò)上調(diào)Bcl-2的表達(dá)來(lái)抑制上皮細(xì)胞的凋亡,為臨床上阻斷白斑的癌變以及預(yù)防、治療OLK和OSCC提供新的思路。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R781.5;R739.8
【部分圖文】：

陽(yáng)性(SPX100)陽(yáng)性(SpX200)圖9OSCC組織KGFR免疫組化染色呈陽(yáng)性(SPX400)圖10OSCC組織KGFR免疫組化染色呈陽(yáng)性(SPX400)

圖13正�？谇徽衬cl一2免疫組化染色呈弱陽(yáng)性 (SPX100)圖14正�？谇徽衬cl一2免疫組化染色呈弱陽(yáng)性 (sPX200)廠一~一寧:夕，萬(wàn)圖巧正�？谇徽衬cl一2免疫組化染圖 16OLK組織Bel一2免疫組化染色

圖13正常口腔粘膜Bcl一2免疫組化染色呈弱陽(yáng)性 (SPX100)圖14正�？谇徽衬cl一2免疫組化染色呈弱陽(yáng)性 (sPX200)廠一~一寧:夕，萬(wàn)圖巧正常口腔粘膜Bcl一2免疫組化染圖 16OLK組織Bel一2免疫組化染色
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