[目的]通過體外原代培養(yǎng)SD大鼠髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞,建立細(xì)胞模型。研究體外髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞加載機(jī)械壓應(yīng)力后,不同時(shí)點(diǎn)成骨細(xì)胞的增殖和凋亡的變化,對(duì)壓應(yīng)力刺激導(dǎo)致的成骨細(xì)胞生物學(xué)和生物力學(xué)特性改變進(jìn)行初步探討,為顳下頜關(guān)節(jié)改建的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法]采用改良貼壁組織塊反復(fù)消化法培養(yǎng)細(xì)胞。通過倒置顯微鏡和HE染色觀察其細(xì)胞形態(tài)；用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和鈣化結(jié)節(jié)茜素紅S (alizarin red S,ARS)染色方法進(jìn)行細(xì)胞鑒定；噻唑藍(lán)(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法檢測(cè)其生物學(xué)特性。運(yùn)用Forcel四點(diǎn)彎曲細(xì)胞力學(xué)加載儀對(duì)體外培養(yǎng)的軟骨下骨成骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組施加壓應(yīng)力(強(qiáng)度2000μstrain頻率0.5Hz)1h,分別于加力后Oh、6h、12h、18h、24h收集細(xì)胞和進(jìn)行細(xì)胞流式檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞的增殖和凋亡的數(shù)據(jù)。對(duì)照組除不加力之外,其它培養(yǎng)條件和檢測(cè)方法與實(shí)驗(yàn)組相同。 [結(jié)果]采用改良貼壁組織塊反復(fù)消化法成功培養(yǎng)出原代成骨細(xì)胞,其形態(tài)學(xué)、生長(zhǎng)特性和生物學(xué)特性符合成骨細(xì)胞特性；堿性磷酸酶染色和鈣化結(jié)節(jié)茜素紅S染色均呈陽性,證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞是成骨細(xì)胞。壓應(yīng)力1h后實(shí)驗(yàn)組的增殖指數(shù)在加力結(jié)束時(shí)Oh較對(duì)照組增高(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但加力后6h檢測(cè)到指數(shù)逐漸恢復(fù),并在6h-24h內(nèi)表現(xiàn)出與對(duì)照組相似的水平和變化趨勢(shì),差異無顯著性(P0.05)；實(shí)驗(yàn)組的S期細(xì)胞百分比加力結(jié)束后0h-24h都較對(duì)照組增高(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但實(shí)驗(yàn)組的S期細(xì)胞百分比與增殖指數(shù)兩者之間沒有簡(jiǎn)單的線性關(guān)系；實(shí)驗(yàn)組的凋亡指數(shù)加力結(jié)束時(shí)0h較對(duì)照組降低(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但加力后6h檢測(cè)到實(shí)驗(yàn)組的增殖指數(shù)逐漸恢復(fù),并在6h-24h內(nèi)表現(xiàn)出與對(duì)照組相似的水平和變化趨勢(shì),差異無顯著性(P0.05)。 [結(jié)論]本實(shí)驗(yàn)采用改良貼壁組織塊反復(fù)消化法成功體外培養(yǎng)SD大鼠髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞有限細(xì)胞系。適當(dāng)?shù)膲簯?yīng)力后早期能提高成骨細(xì)胞的增殖能力和抑制凋亡,但這種影響會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱,成骨細(xì)胞具有平衡生長(zhǎng)過程中增殖和凋亡水平的內(nèi)在調(diào)控能力。即一定的壓應(yīng)力能促進(jìn)成骨細(xì)胞的生長(zhǎng),促進(jìn)新骨的形成和軟骨下骨的改建。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R780.2
【文章目錄】：
英文縮寫語表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 SD大鼠髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞的原代培養(yǎng)與鑒定
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 壓應(yīng)力對(duì)成骨細(xì)胞增殖與凋亡的影響
    1 材料
    2 方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
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