發(fā)布時(shí)間：2020-10-20 19:19

　　 目的 在牙齒發(fā)育期間,牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞,形成原發(fā)性牙本質(zhì)；在牙齒萌出后,無論年輕恒牙,還是成熟恒牙,牙髓在受創(chuàng)傷和感染時(shí),牙髓組織中的成牙本質(zhì)細(xì)胞和新分化的成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞就會(huì)形成第三期牙本質(zhì),表明牙髓組織具有較強(qiáng)的自我防御能力和自身修復(fù)潛能。關(guān)于成牙本質(zhì)細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的分化以及牙本質(zhì)形成的確切機(jī)制還不完全清楚,但目前認(rèn)為一些生物分子如轉(zhuǎn)錄因子、信號分子、生長因子、細(xì)胞外基質(zhì)分子等參與調(diào)節(jié)牙髓組織中的細(xì)胞增殖、分化和基質(zhì)合成。 LIM礦化蛋白1 (LIM mineralization protein-1, LMP-1)是LIM結(jié)構(gòu)域蛋白家族成員,是一種胞內(nèi)非分泌蛋白,它廣泛存在于各種組織中。LMP-1調(diào)控成骨細(xì)胞的分化和成熟以及骨的形成。近年來有文獻(xiàn)報(bào)道LMP-1在人健康成熟牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體中的前期牙本質(zhì)、成牙本質(zhì)細(xì)胞、未礦化的修復(fù)性牙本質(zhì)、成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和牙髓成纖維細(xì)胞中均有表達(dá)；提示LMP-1在牙髓細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化,牙本質(zhì)基質(zhì)的礦化中起著重要作用。但目前有關(guān)LMP-1在年輕恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳頭組織中表達(dá)差異的研究未見報(bào)道。而對這一問題的深入研究和探討,將有助于我們進(jìn)一步認(rèn)識牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的發(fā)育、成熟以及年輕恒牙牙髓修復(fù)能力的生物學(xué)機(jī)制,并為臨床研究活髓保存治療技術(shù)提供新的思路。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用RT-PCR和Western-blot技術(shù),首次檢測并比較LMP-1在人年輕恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳頭組織中的表達(dá),以探尋其在牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體發(fā)育和成熟中的作用,為臨床探尋新的活髓保存治療方法提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 材料和方法 收集48例因正畸或阻生拔除的健康無齲的牙齒,研究對象年齡為11-30歲,均無全身系統(tǒng)性疾病,近三個(gè)月未曾服用免疫制劑和抗菌藥物。牙齒拔除后立即將年輕恒牙的牙乳頭用鑷子分離,凍存；然后將牙齒縱向劈開,完整取出牙髓組織,凍存。成熟恒牙直接將牙齒縱向劈開,完整取出牙髓組織,凍存。 按恒牙牙根發(fā)育的八個(gè)階段,結(jié)合臨床和X光片檢查,將R2／3,R3／4的年輕恒牙的牙乳頭組織歸為第1組,共24例；將R2／3,R3／4的年輕恒牙的牙髓組織歸為第2組(根尖孔未閉合組,根尖孔呈喇叭口狀),共24例；將Ac的成熟恒牙的牙髓組織歸為第3組(根尖孔閉合組),共24例；(R2／3代表牙根形成2／3；R3／4代表牙根形成3／4；Ac代表根尖已封閉)。每組中有12例樣本用于RT-PCR檢測,另12例樣本用于Western-blot檢測。 采用RT-PCR和Western-blot技術(shù)對LMP-1進(jìn)行基因水平和蛋白水平的檢測,采用SPSS 11.0軟件包,應(yīng)用單因素方差分析方法對圖像分析的結(jié)果(即灰度值)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 無論是在mRNA水平還是在蛋白質(zhì)水平,LMP-1在年輕恒牙的牙乳頭組織、年輕恒牙的牙髓組織和成熟恒牙的牙髓組織中均有表達(dá),但表達(dá)強(qiáng)度不同。LMP-1在年輕恒牙牙髓組織中的表達(dá)較其在年輕恒牙牙乳頭組織以及成熟恒牙牙髓組織中的表達(dá)明顯上調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論 1、本實(shí)驗(yàn)用RT-PCR和Western-blot技術(shù)首次檢測出LMP-1在年輕恒牙的牙乳頭組織,年輕恒牙的牙髓組織及成熟恒牙的牙髓組織中有表達(dá)。 2、年輕恒牙牙髓組織中LMP-1的表達(dá)高于其在年輕恒牙牙乳頭組織中的表達(dá),并且高于成熟恒牙牙髓組織中的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R788
【部分圖文】：

第2組中的表達(dá)明顯高于其它兩組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，尸<0.05;而LMP一1在第l組與第3組中的表達(dá)相比，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，尸>0.05。(圖l，圖2，表l)500坤100坤500bP100坤.口口口口口......介actin圖1，各組組織中LMP一1與p一 actinmRNA的Rl’ -pCR產(chǎn)物電泳結(jié)果注:1一4為第1組，年輕恒牙的牙乳頭組織;5一8為第2組，年輕恒牙的牙髓組織;9一12為第3組，成熟恒牙的牙髓組織; M:MarkerLMP小Z14bPp一aetin:439bP表1，Rl’ -PCR檢測各組組織中LMP一lmRNA表達(dá)的圖像分析結(jié)果組別例數(shù)(n)灰度值的比值(見士‘)1212 0.2483士0.0921 0.4617士0.2379’ 0.3050士0.0946△注:’與第l組相t匕，‘與第3組相比

尸<0.05)。其中LMP一1在第2組中的表達(dá)明顯高于其它兩組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，尸<0.05;而LMP一1在第1組與第3組中的表達(dá)相比，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05。(圖3，圖4，表2) 123456789U護(hù)wel60KDp一c血42KD圖3，LMP一1與p一actin在各組組織中的蛋白表達(dá)注:1一3為第一組，年輕恒牙的牙乳頭組織;4一6為第二組，年輕恒牙的牙髓組織;7一9為第三組，成熟恒牙的牙髓組織。

尸<0.05)。其中LMP一1在第2組中的表達(dá)明顯高于其它兩組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，尸<0.05;而LMP一1在第1組與第3組中的表達(dá)相比，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05。(圖3，圖4，表2) 123456789U護(hù)wel60KDp一c血42KD圖3，LMP一1與p一actin在各組組織中的蛋白表達(dá)注:1一3為第一組，年輕恒牙的牙乳頭組織;4一6為第二組，年輕恒牙的牙髓組織;7一9為第三組，成熟恒牙的牙髓組織。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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2 王忠東;牙髓自身修復(fù)潛能的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;1996年02期

3 劉素彩,趙志剛,趙長安,張志勇,劉靖,李恩;LMP-1 mRNA反義寡核苷酸抑制大鼠成骨細(xì)胞的分化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2002年02期

4 王效英;張旗;王強(qiáng);陳卓;陳智;;胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子LIM礦化蛋白1在人牙髓細(xì)胞體外礦化過程中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2006年03期

5 王效英;張旗;王強(qiáng);陳卓;陳智;;胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子LIM礦化蛋白-1在人牙周膜細(xì)胞體外礦化過程中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2007年01期

本文編號：2849058