目的： 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究三種排齦線(腎上腺素排齦線、硫酸鋁排齦線、不含藥排齦線)的細(xì)胞相容性及排齦線在不同浸提時(shí)間(5min、10min、15min、30min)下對(duì)體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細(xì)胞(human gingival fibroblasts, HGFs)的毒性大小,為臨床選擇合適的排齦線和排齦時(shí)間提供理論依據(jù)。 方法： 實(shí)驗(yàn)1、采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)HGFs,并進(jìn)行形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)鑒定。對(duì)HGFs進(jìn)行凍存與復(fù)蘇,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。 實(shí)驗(yàn)2、三種排齦線(含腎上腺素排齦線、含硫酸鋁排齦線、不含藥排齦線)分別浸透在含10%胎牛血清的DMEM中24h。浸提液再按1：1和1：4濃度稀釋,分別作用于體外培養(yǎng)的HGFs,陰性對(duì)照組為含10%胎牛血清的DMEM,噻唑蘭(Thi-azolyl blue, MTT)比色測(cè)定細(xì)胞增殖活性,透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。 實(shí)驗(yàn)3、將上述每種排齦線各4段,分別浸透在含10%胎牛血清的DMEM中,5min、10min、15min、30min后取出排齦線。采用MTT比色法觀察不同時(shí)間的浸提液對(duì)HGFs的活性影響；Annexin/PI雙染法檢測(cè)不同時(shí)間的浸提液對(duì)HGFs凋亡的影響。 結(jié)果： 1、HGFs原代培養(yǎng)成功率為86.7%,細(xì)胞呈梭形或紡錘形。免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry, IHC)鑒定抗波形蛋白抗體染色陽(yáng)性,抗角蛋白抗體染色陰性,為中胚層來(lái)源的成纖維細(xì)胞。HGFs凍存與復(fù)蘇成功,細(xì)胞經(jīng)兩次傳代后生物學(xué)性狀與原代相似。 2、MTT結(jié)果顯示：每組排齦線浸提液經(jīng)1：1稀釋后細(xì)胞活性低于正常(p0.05),1：4稀釋后只有腎上腺素排齦線細(xì)胞活性較正常組低(p0.05)；三組排齦線浸提液毒性大小依次為：腎上腺素排齦線硫酸鋁排齦線不含藥排齦線(p0.05)。透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope, TEM)觀察,腎上腺素組部分細(xì)胞出現(xiàn)凋亡,其他兩組僅觀察到細(xì)胞器的損傷。 3、MTT結(jié)果顯示：三種排齦線在不同浸提時(shí)間下均產(chǎn)生毒性損傷作用,每組排齦線浸提5min與1Omin的細(xì)胞毒性作用相同(p0.05)；腎上腺素排齦線浸提5min與15min、30min比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,硫酸鋁排齦線浸提5min與30min比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；不含藥排齦線在各個(gè)浸提時(shí)間段毒性損傷作用相同(p0.05)。流式細(xì)胞儀(Flow cytometer, FCM)觀察,不同浸提時(shí)間下的排齦線可誘導(dǎo)HGFs凋亡的發(fā)生,隨著浸提時(shí)間延長(zhǎng)(15min、30min), HGFs的早期凋亡率逐漸增加,顯著高于正常組(p0.05)。 結(jié)論： 1、采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代HGFs及凍存與復(fù)蘇方法可行,為進(jìn)一步從細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)水平研究口腔材料的細(xì)胞相容性奠定了基礎(chǔ)。 2、各組排齦線浸提液對(duì)HGFs都有一定的毒性,腎上腺素排齦線毒性最大,硫酸鋁排齦線毒性次之,不含藥排齦線也出現(xiàn)了一定的細(xì)胞毒性。 3、不同浸提時(shí)間下的排齦線對(duì)HGFs的活性及凋亡有不同程度的影響,隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞活性逐漸降低,凋亡率增大。 4、使用腎上腺素排齦線排齦時(shí)不超過(guò)l0min為宜,硫酸鋁排齦線排齦不超過(guò)15min。
【學(xué)位單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R783.3
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
引言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 正常人牙齦成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)、鑒定、凍存及復(fù)蘇
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 三種排齦線對(duì)體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細(xì)胞的毒性比較
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 不同浸提時(shí)間下的排齦線對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞的毒性研究
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附圖
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】

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