牙髓血管再生/牙髓血運(yùn)重建是治療牙髓壞死的年輕恒牙的新方法,可達(dá)到促使牙根繼續(xù)發(fā)育的臨床效果,較傳統(tǒng)的根管治療具有明顯的優(yōu)越性。血小板濃縮生長因子(concentrate growth factors,CGF)是最新一代的血小板濃縮物,富含大量生長因子,能促進(jìn)組織愈合,而且制備容易,生物相容性高,在口腔領(lǐng)域口腔種植,牙周手術(shù)等已有較多應(yīng)用,但其在牙髓血管再生中的作用卻鮮有研究。目的:以CGF體外作用于人牙髓細(xì)胞(dental pulp cells,DPCs)和人臍靜脈血內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。研究CGF對DPCs和HUVECs的成血管作用,為CGF在牙髓血管再生中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:通過改良組織酶消化法分離獲得人牙髓細(xì)胞后傳代培養(yǎng)。取健康志愿者靜脈血制成CGF,獲得濃縮生長因子提取液(concentrate growth factors extracts,CGFe)。經(jīng)劑量選擇分為2%CGFe、5%CGFe、10%CGFe和15%CGFe不同濃度組為實(shí)驗(yàn)組,對照組培養(yǎng)基為僅含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基,分別體外培養(yǎng)牙髓細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞增殖活性;qRT-PCR檢測牙髓細(xì)胞VEGF、PDGF、CXCR4的mRNA表達(dá);western blotting檢測牙髓細(xì)胞VEGF、CXCR4的蛋白表達(dá)量;transwell實(shí)驗(yàn)檢測CGFe對內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響;體外成血管實(shí)驗(yàn)檢測內(nèi)皮細(xì)胞形成血管狀結(jié)構(gòu)的能力。結(jié)果:CCK-8結(jié)果顯示CGFe能夠明顯促進(jìn)牙髓細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,10%以內(nèi)的CGFe促進(jìn)牙髓細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖效果呈濃度依賴性(P0.05);15%CGFe對牙髓細(xì)胞增殖影響與10%CGFe無明顯差異(P0.05);CGFe培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞36h時(shí),10%CGFe組較15CGFe組促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用更強(qiáng)(P0.05)。因此確定10%CGFe為最佳作用濃度,后續(xù)實(shí)驗(yàn)組僅采用2%CGFe、5%CGFe和10%CGFe三組。CGFe作用于DPCs 24h后牙髓細(xì)胞VEGF,PDGF,CXCR4 mRNA表量和VEGF,CXCR4蛋白表達(dá)量均較對照組明顯升高,以10%CGFe基因表達(dá)上調(diào)最明顯,且結(jié)果呈濃度依賴性(P0.05)。CGFe能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移,并促進(jìn)體外形成血管狀結(jié)構(gòu),10%CGFe作用效果最明顯,且結(jié)果呈濃度依賴性(P0.05)。結(jié)論:CGF能促進(jìn)牙髓細(xì)胞體外增殖和成血管分化;CGF能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,遷移和體外形成血管狀結(jié)構(gòu)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R781.3
【部分圖文】：

牙髓細(xì)胞生長形態(tài)（X40）

CGFe對牙髓細(xì)胞增殖活性的作用（*：P<0.05）

PDGF，CXCR4，VEGFmRNA的表達(dá)（*：P<0.05）
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 姜波;董凱;柳忠豪;;不同濃度CGF提取液對成骨細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國口腔種植學(xué)雜志;2014年04期

2 馮毅;馬靜;黃貞;;牙髓干細(xì)胞促進(jìn)牙髓血管生成的相關(guān)分子機(jī)制研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2013年12期

3 ;Mesenchymal Stem Cells and Tooth Engineering[J];International Journal of Oral Science;2009年01期

本文編號：2845791