發(fā)布時(shí)間：2020-10-13 08:26

　　 牙齒的發(fā)育及牙胚的細(xì)胞分化是一系列口腔上皮和外胚層間充質(zhì)組織細(xì)胞間相互作用的結(jié)果。牙本質(zhì)形成過程中,成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化、成熟,分泌基質(zhì),以及誘導(dǎo)羥基磷灰石晶體沉積,都是由多種基質(zhì)蛋白相互影響共同參與完成。牙本質(zhì)有機(jī)基質(zhì)決定其形態(tài)并且是礦物形成的基本物質(zhì)。有機(jī)基質(zhì)主要是膠原,非膠原基質(zhì)約占10 %,它在牙本質(zhì)的生物礦化過程中起著模板和調(diào)節(jié)作用。目前對非膠原蛋白的研究大多集中在單一蛋白質(zhì)的生物特性,但仍沒有發(fā)現(xiàn)牙本質(zhì)形成的核心蛋白,對于非膠原蛋白的混合作用研究不多。本研究采用組織蛋白提取方法從牙本質(zhì)蛋白中獲得DMPCs,并利用體外實(shí)驗(yàn)初步檢測混合蛋白相互作用對hDPSC生長的影響,觀察其生物活性。 1牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白的提取和分離純化 取六齡豬上下頜磨牙牙胚,4℃進(jìn)行蛋白分離,磨碎后采用EDTA/鹽酸胍浸泡提取牙本質(zhì)蛋白,浸泡提取7d后取上清,分別標(biāo)記并加以濃縮,利用ATKA蛋白純化分析儀分離純化蛋白質(zhì),經(jīng)PBS透析后濃縮以備用。經(jīng)SDS-PAGE電泳圖譜檢測,根據(jù)相對分子質(zhì)量與相對遷移率的關(guān)系,可以計(jì)算出相對分子質(zhì)量分別為: 96Kda、38Kda、20Kda以及小分子,其中20Kda的染色條帶最重。與文獻(xiàn)中常見DSP、DPP相對分子量接近。說明EDTA提取法能夠提取到多種非膠原蛋白,同時(shí)分子量檢測證實(shí)能夠建立一條穩(wěn)定提取DMPCs的方法。 2 DMPCs對hDPSC生長的影響 設(shè)置4個(gè)實(shí)驗(yàn)組:使培養(yǎng)基內(nèi)DMPCs終末濃度分別為50μg/ml、100μg/ mL、150μg/ml、200μg/ml,并以2%FCS的DMEM培養(yǎng)液作對照組,利用MTT法、ALP法分別檢測DMPCs對hDPSC生長的影響。結(jié)果顯示,1d、3d時(shí)100μg/ml促進(jìn)hDPSC增殖的能力與對照組比較有顯著差異(P0.05),5d作用不明顯,結(jié)合hDPSC生長曲線考慮是生長飽和所致。從線性關(guān)系上分析,DMPCs對hDPSC的作用是呈遞進(jìn)關(guān)系的,提示一定濃度的DMPCs可以促進(jìn)牙髓干細(xì)胞增殖,在牙髓干細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞分化的過程中發(fā)揮作用,促進(jìn)牙本質(zhì)形成。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

果質(zhì)的分離和純化 所示，藍(lán)色曲線表示蛋白質(zhì)在 OD280nm 的吸收曲線，2有 2 組較高濃度蛋白析出；灰色曲線表示離子濃度電導(dǎo)曲DTA 析出的表示。圖 2 中藍(lán)色曲線表示蛋白質(zhì)在 OD280n可見在 80-100ml 段有較高吸收峰，說明該處蛋白濃度較峰說明還有低濃度蛋白析出；綠色曲線表示洗脫液的含量示鹽濃度變化曲線。

圖 2 Q-Sepharose Fast Flow column 層析曲線相對分子量（SDS-PAGE 檢測）得到的 SDS-PAGE 電泳圖譜見圖，可見深淺不均的染子質(zhì)量與相對遷移率的關(guān)系，可以計(jì)算出相對分子質(zhì)da、20Kda 以及小分子，其中 20Kda 的染色條帶最

圖 1 牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白提取物對人牙髓干細(xì)胞增殖的影響3.3 DMPCs 對 hDPSC ALP 活性的影響分析表明，牙本質(zhì)基質(zhì)提取物對人牙髓干細(xì)胞內(nèi) ALP 活性有促進(jìn)用。培養(yǎng) 1d 時(shí)，100μg/ml 組可促進(jìn)人牙髓干細(xì)胞 ALP 活性(P<0.05)，養(yǎng) 3d 時(shí) 100μg/ml 和 150μg/ml 均可促進(jìn)人牙髓干細(xì)胞 ALP 活性(P <0.0其它各實(shí)驗(yàn)組于對照組沒有顯著性差異(P > 0. 05)。表 2 牙本質(zhì)基質(zhì)提取物對人牙髓干細(xì)胞 ALP 活性的影響（OD:410nm）實(shí) 驗(yàn) 組實(shí)驗(yàn)天數(shù)50μg/ml 100μg/ml 150μg/ml 200μg/ml對照組1d 0.332±0.004 0.523±0.007a0.374±0.005 0.379±0.010 0.355±0.3d 0.558±0.005 0.762±0.007b0.729±0.008b0.537±0.002 0.590±0.
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本文編號：2838953