目的:長(zhǎng)期暴露于口腔修復(fù)體研磨粉塵可導(dǎo)致口腔從業(yè)人員呼吸系統(tǒng)疾病,如肺纖維化、矽肺等,為明確修復(fù)體調(diào)磨粉塵對(duì)口腔臨床醫(yī)生的影響,將常見(jiàn)粉塵,樹(shù)脂(Poly methylmethacrylate polymer,PMMA)、維他靈(Vitallium)、瓷粉塵作用于RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞,檢測(cè)其毒性作用相關(guān)指標(biāo),為口腔從業(yè)人員的個(gè)人防護(hù)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法:1、模擬臨床操作收集三種口腔修復(fù)體研磨粉塵及經(jīng)過(guò)研缽精細(xì)研磨后粉塵,應(yīng)用掃描電子顯微鏡(Scanning electron microscope,SEM)、激光粒度分析儀(Particulate size description analyser,PSDA)、能量分散光譜儀(Energy dispersive X-ray,EDX)對(duì)粉塵顆粒的形狀、直徑、成分進(jìn)行檢測(cè)。2、將上述三種精細(xì)研磨粉塵配制成300μg/ml作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞,通過(guò)光學(xué)顯微鏡及吖啶橙(Acridine orange,AO)熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化,探討口腔修復(fù)體研磨粉塵對(duì)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞形態(tài)的影響。3、將上述三種精細(xì)研磨粉塵配制成50μg/ml、150μg/ml、300μg/ml、450μg/ml、600μg/ml作用于RAW264.7巨噬細(xì)胞,24h、48h后通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(Lactic dehydrogenase,LDH)的含量,6h、12h、24h、48h后檢測(cè)細(xì)胞產(chǎn)生活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的水平,采用析因設(shè)計(jì)方差分析、單因素方差分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),進(jìn)一步探討粉塵對(duì)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生損傷的可能機(jī)制。結(jié)果:1、三種粉塵具有不同的形狀、粒徑及組成成分。PMMA組呈團(tuán)塊狀,邊緣圓鈍不規(guī)則,Vitallium組呈片狀,邊緣形態(tài)不規(guī)則,瓷組呈立方體狀,邊緣銳利不規(guī)則;粉塵粒徑分布范圍廣泛,精細(xì)研磨后,粒徑明顯變小;PMMA粉塵以C、O為主,Vitallium粉塵以Cr、Co、Mo為主,瓷粉塵以Si、Al、O為主。2、三種粉塵在300μg/ml濃度下,作用于RAW264.7細(xì)胞,光學(xué)顯微鏡下見(jiàn),細(xì)胞偽足數(shù)目增多,且偽足不同程度伸長(zhǎng),細(xì)胞呈現(xiàn)不規(guī)則、氣球樣變狀態(tài)。AO熒光染色后發(fā)現(xiàn)染塵細(xì)胞核偏移、細(xì)胞偽足伸長(zhǎng)。3、三種粉塵分別在50μg/ml、150μg/ml、300μg/ml、450μg/ml、600μg/ml作用于RAW264.7,LDH活性及ROS熒光強(qiáng)度結(jié)果表明,隨著時(shí)間的延長(zhǎng)、濃度增加,LDH、ROS釋放量升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);瓷粉塵組LDH、ROS高于Vitallium組和PMMA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、三種口腔修復(fù)體精細(xì)研磨粉塵作用于RAW264.7,隨時(shí)間延長(zhǎng)、濃度升高,細(xì)胞產(chǎn)生的LDH、ROS也隨之升高,提示粉塵毒性存在一定的時(shí)間、劑量依賴(lài)性,提示臨床醫(yī)生應(yīng)盡量減少粉塵接觸。2、瓷粉塵較PMMA粉塵和Vitallium粉塵對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞的損傷更為嚴(yán)重。3、口腔修復(fù)體研磨粉塵作用于RAW264.7細(xì)胞,24h、48h兩時(shí)間點(diǎn)LDH與ROS變化存在一致性,提示粉塵產(chǎn)生毒性的可能機(jī)制是粉塵進(jìn)入細(xì)胞后產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),損傷細(xì)胞膜等結(jié)構(gòu),因此應(yīng)加強(qiáng)臨床醫(yī)生的職業(yè)防護(hù),減少粉塵對(duì)醫(yī)生的傷害。
【學(xué)位單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R783
【部分圖文】：

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 三種修復(fù)體研磨粉塵 SEM 檢測(cè)采用 SEM 對(duì)精細(xì)研磨前后口腔修復(fù)體粉塵進(jìn)行表面形態(tài)的檢測(cè)，結(jié)果顯示三種口腔修復(fù)體研磨粉塵形態(tài)差異很大，如圖 1、2 所示，PMMA 組 (A、B) 呈團(tuán)塊狀，邊緣圓鈍不規(guī)則，且粒徑相差較大。Vitallium 組 (C、D) 呈片狀，邊緣形態(tài)不規(guī)則。瓷粉塵組 (E、F) 呈立方體狀，邊緣銳利不規(guī)則。精細(xì)研磨后除粉塵粒徑明顯變小外，其余無(wú)明顯改變。

圖 2 口腔修復(fù)體塵粒 SEM 觀察結(jié)果 (1000×)(a：PMMA 粉塵，b：Vitallium 粉塵，c：瓷粉塵)3.2 三種修復(fù)體研磨粉塵 PSDA 檢測(cè)采用 PSDA 對(duì)三種口腔修復(fù)體材料精細(xì)研磨前后粒徑進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表 1 所示�？梢�(jiàn)三種粉塵粒徑分布范圍廣泛，各不相同，精細(xì)研磨后小粒徑粉塵含量不同程度增加。其中瓷粉塵精細(xì)研磨前后粒徑小于10μm的粉塵分別占總粉塵的25.53%和42.3%，明顯高于其他兩組粉塵。表 1 口腔修復(fù)體材料精細(xì)研磨前后直徑分布PMMAPMMA研磨后VitalliumVitallium研磨后瓷瓷研磨后<5μm(%) 4.19 8.23 0.08 1.03 12.79 21.05

圖 3 口腔修復(fù)體塵粒組成成分(A：PMMA 組，B：Vitallium 組，C：瓷組)3.4 三種修復(fù)體研磨粉塵作用于 RAW264.7 相差倒置顯微鏡結(jié)果采用相差倒置顯微鏡觀察三種口腔修復(fù)體研磨粉塵在 300μg/ml 濃度下，作用于RAW264.7，24h、48h 細(xì)胞形態(tài)的變化，如圖 4，陰性對(duì)照組細(xì)胞呈規(guī)則圓形，而三種口腔修復(fù)體研磨粉塵使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，培養(yǎng) 24h、48h 后，粉塵吸附于細(xì)胞表面或進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，細(xì)胞呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài)，偽足增多，且偽足不同程度伸長(zhǎng)，部分細(xì)胞甚至出現(xiàn)氣球樣變狀態(tài)。
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本文編號(hào)：2838213