目的:利用不同劑量的人舌鱗癌細(xì)胞Tca8113培養(yǎng)上清液模擬腫瘤發(fā)展不同時(shí)期腫瘤微環(huán)境對小鼠髓源性樹突狀細(xì)胞生長分化及功能的影響,并探討其發(fā)生的可能機(jī)制。 方法:利用無菌小鼠長骨骨髓細(xì)胞,對照組在常規(guī)重組小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重組小鼠白介素-4(rmIL-4)培養(yǎng)液中培養(yǎng),誘導(dǎo)分化為DCs;實(shí)驗(yàn)組在上述培養(yǎng)液中再加入不同劑量的舌鱗癌細(xì)胞株Tca8113培養(yǎng)上清液。培養(yǎng)第六天收集各組懸浮細(xì)胞,部分細(xì)胞臺酚藍(lán)染色法計(jì)活細(xì)胞數(shù),流式細(xì)胞術(shù)檢測DCs表型(CD86、CD11c、MHC-Ⅱ)表達(dá);部分細(xì)胞加入LPS觀察其對外源性刺激的反應(yīng),流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)LPS刺激后DCs表型CD86、CD11C、MHC-Ⅱ表達(dá),混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)比較其在體外刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力 結(jié)果:tca8113微環(huán)境下可誘導(dǎo)培養(yǎng)出具有典型形態(tài)和免疫表型的樹突狀細(xì)胞;低劑量tca8113培養(yǎng)上清液微環(huán)境刺激增強(qiáng)刺激DCs成熟,中等劑量tca8113培養(yǎng)上清液微環(huán)境不影響DCs成熟,但能促進(jìn)骨髓前體細(xì)胞分化為imDC;高劑量tca8113培養(yǎng)上清液微環(huán)境抑制DCs分化成熟;中等劑量cs-tca8113微環(huán)境下誘導(dǎo)imDC具有抵抗外源性抗原刺激成熟能力。 結(jié)論:成功建立舌鱗癌微環(huán)境下樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)分化模型;舌鱗癌微環(huán)境對樹突狀細(xì)胞分化影響的多樣性可能與環(huán)境中免疫因子濃度密切相關(guān)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1不同劑量cs-tca8113干預(yù)下獲得的樹突狀細(xì)胞數(shù)量腫瘤微環(huán)境下獲得的DCs數(shù)量隨cs-tca8113劑量增加有逐步減少趨勢（圖1）。低劑量cs-tca8113干預(yù)下獲得的DCs（1 、2組）數(shù)量大于對照組、中劑量組中4 、5 、6組、大劑量組（7、8組），且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05；中等劑量組（group 3、4 、5、6）生成DC數(shù)量與對照組接近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 P>0.05；高劑量組生成DCs顯著低于其他3組，p<0.05。（表1）

2.2 樹突狀細(xì)胞表免疫型檢測分析在模擬舌鱗癌微環(huán)境下，骨髓前體細(xì)胞成功誘導(dǎo)分化為具有典型免疫表型DCs，見圖2；隨cs-tca8113劑量逐步增大，MHC-Ⅱ+CD86表達(dá)有逐步減弱趨勢，MHC-Ⅱ表達(dá)逐漸增強(qiáng)趨勢（圖2）。MHC-Ⅱ+CD86表達(dá)：對照組與group 1、2、3、4、7、8 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05;低劑量組（1、2組）與對照組、中劑量組、高劑量組對比差異有MHC-Ⅱ:對照組與高劑量組、5組、6、組差異有顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05；高劑量組（7、8組）與低劑量組、高劑量組、對照組相比有顯著性差異 p<0.05；著性 P<0.05；低劑量組、3組、4組之間無明顯差異 p>0.05（表1）。3 討論DCs 是迄今為止發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞（APC）, 是機(jī)體獲得性免疫的關(guān)鍵[19-20]。腫瘤微環(huán)境的免疫抑制作用機(jī)制之一就是腫瘤細(xì)胞分泌多種免疫抑制因子形成局部高強(qiáng)度免疫抑制區(qū)。免疫抑制因子主要通過三條途徑抑制 DCs 抗原。呈遞功能：一.抑制骨髓前體細(xì)胞 CD34+分化為 DCs，減少樹突狀細(xì)胞數(shù)目；

HCⅡCD8669.83±1.36 69.81±1.83 89.67±2.70 62.85±3.50HCⅡ 3.77+0.50 14.54±0.49 1.36±0.54 13.21±1.00.2 腫瘤微環(huán)境抑制髓源性小鼠樹突狀細(xì)胞刺激 T 淋巴細(xì)胞增殖能力對照組 DC 刺激 T 淋巴細(xì)胞增殖 SI=2.86±0.29,，經(jīng) LPS 刺激后 LPS+DC T 細(xì)胞增殖活性明顯提高 SI=4.02±0.09 p<0.05; tca8113-DC 刺激淋巴細(xì)胞能力與 DC、LPS+DC 相比明顯下降（SI=2.03±0.19），p<0.05;tca8113-DCPS 刺激后，LPS+tca8113-DC 誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖能有一定提高，但兩者之間差統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。圖 3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2834627