目的 1.建立一種操作更加簡單、成活率高、生物相似性高的口腔鱗狀細胞癌動物模型,為口腔腫瘤實驗研究奠定基礎; 2.采用光動力學療法( photodynamic therapy,PDT )聯(lián)合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)緩釋劑治療口腔鱗癌,研究其在促進腫瘤細胞凋亡中是否具有協(xié)同和強化作用。 方法 采用局部植入瘤塊法建立100只兔Vx-2口腔鱗癌動物模型,成功后隨機分為5組:A組,空白對照組;B組,靜脈給藥組;C組,緩釋劑組;D組,PDT組;E組,緩釋劑聯(lián)合PDT組。A組:不予任何處理;B組:全麻后耳緣靜脈注射2.5mg/ml氟尿嘧啶溶液30ml(75mg),注射速度控制為0.5ml/min;C組:將5-FU緩釋劑用專用植藥針按時鐘4個位點植入到腫瘤中,單點給藥不超過20mg,總劑量為75mg;D組:先從耳緣靜脈注入稀釋為1mg/ml的HPD0.3mg/kg,避光養(yǎng)殖24h后麻醉。照射時術區(qū)外用生理鹽水紗布覆蓋保護,光纖末端距離腫瘤約2cm,波長630nm,光斑覆蓋腫瘤,激光功率密度為200mW/cm3,照射10min,能量密度為100J/cm2;E組:先局部植入5-FU緩釋劑(方法劑量同C組)然后予以激光照射,照射前24h靜脈注射HPD。接下來對各實驗組兔子精神、飲食、活動等行為學進行觀察,連續(xù)五周測量腫瘤體積,五周后處死動物取腫瘤組織做組織學觀察和免疫組化、流式細胞儀等來評價腫瘤抑瘤率、生長狀態(tài)、腫瘤細胞的凋亡率及腫瘤組織中p53基因蛋白表達情況來初步研究PDT聯(lián)合5-FU緩釋劑的療效,各組數(shù)據(jù)比較用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,以P0.05為具有顯著性差異。 結果 1. Vx-2腫瘤移植成功率較高,成瘤率百分之百,操作簡單,具有可重復性。 2.治療后連續(xù)觀察五周并測腫瘤體積,發(fā)現(xiàn)治療后第1周各組間腫瘤體積無明顯差異,第2周起空白對照組、靜脈給藥組和PDT組腫瘤生長較緩釋劑組和聯(lián)合治療組較快。聯(lián)合治療組兔子精神狀態(tài)、飲食、活動等均較其他各組稍顯優(yōu)勢。 3.治療后第五周觀察并計算抑瘤率得:靜脈給藥組(39.9±15.9)%;緩釋劑組(73.8±22.3)%;PDT組(50.6±21.8)%;聯(lián)合治療組(93.6±19.5)%,聯(lián)合治療組抑瘤率明顯低于其他各組,與其他各組間比較具有顯著性差異(P0.05)。 4. HE染色鏡下觀察腫瘤組織為鱗狀細胞癌,聯(lián)合治療組較其他組腫瘤細胞增殖能力下降、核分裂像罕見、細胞大量死亡或凋亡、出現(xiàn)空泡樣變、核固縮等現(xiàn)象。 5.免疫組化測得各組p53基因蛋白陽性表達率為:空白對照組(60%)、靜脈給藥組(50%)、緩釋劑組(30%)、PDT組(45%)、聯(lián)合組(15%),聯(lián)合組明顯低于其他組,各組間比較具有顯著性差異(P0.05)。 6.流式細胞儀檢測腫瘤細胞凋亡率結果:空白對照組(5.05±1.19)%、靜脈給藥組(11.81±0.89)%、緩釋劑組(25.80±13.78)%、PDT組(20.32±11.24)%、聯(lián)合組(32.51±15.32)%,聯(lián)合組明顯高于其他各組,與其他組間比較具有顯著性差異(P0.05),緩釋劑組高于靜脈給藥組及空白對照組,組間比較均具有顯著性差異(P 0.05),PDT組與空白對照組和靜脈給藥組比較具有顯著性差異(P0.05),而緩釋劑組與PDT組比較則無顯著性差異(P0.05)。 結論 采用Vx-2腫瘤組織塊移植法建立口腔鱗狀細胞癌操作簡單,成活率高,是一種較好的可供口腔腫瘤實驗研究的動物模型。在口腔鱗癌治療上5-FU緩釋劑較常規(guī)靜脈給藥在維持抗瘤有效濃度,治療療效上具有一定的優(yōu)勢,與PDT聯(lián)合應用時在抑制腫瘤生長、促進腫瘤細胞凋亡上較其單獨應用效果顯著。因此我們可以得出5-FU與PDT聯(lián)合應用可能成為治療口腔鱗癌的一種新的臨床治療方法。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2008
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

15尿嘧啶約 圖 2 5-FU 緩釋系統(tǒng)劑及散裝劑兩種；管裝劑內包裝為注射針用有效期三年；n derivative,HPD）為北京制藥工業(yè)研究所產）：250mg/支，上海海普制藥廠，購自合肥百P 和 DAB 試劑盒購自福州邁新產品； Kit：由安醫(yī)附院中心實驗室提供；頜面外科病房提供；

B 20 50C 20 30D 20 45E 2010141117222132205252 1510.42 0.0343.4 流式細胞儀測腫瘤細胞凋亡率結果各組隨機取 10 個樣本的腫瘤組織上流式細胞儀檢測結果得空白對照組腫瘤組織凋亡率為（5.109±1.641）%；靜脈給藥組腫瘤組織凋亡率為（11.977±0.552）%；緩釋劑組腫瘤組織凋亡率為（24.481±15.483）%；PDT 組腫瘤組織凋亡率為（20.824±7.486）%；緩釋劑聯(lián)合 PDT 治療組腫瘤組織凋亡率為（35.614±15.190）%。緩釋劑組與 PDT 組比較無顯著性差異（P>0.05）（見圖 8-3，8-4），緩釋劑組與空白對照組及靜脈給藥組比較具有顯著性差異（P<0.05）（見圖 8-1，8-2，8-3），PDT 組與空白對照組比較具有顯著性差異（P>0.05）（見圖 8-4，8-1），緩釋劑聯(lián)合 PDT 治療組與其他各組比較具有顯著性差異（P<0.05）（見圖 8-5）。

B 20 50C 20 30D 20 45E 2010141117222132205252 1510.42 0.0343.4 流式細胞儀測腫瘤細胞凋亡率結果各組隨機取 10 個樣本的腫瘤組織上流式細胞儀檢測結果得空白對照組腫瘤組織凋亡率為（5.109±1.641）%；靜脈給藥組腫瘤組織凋亡率為（11.977±0.552）%；緩釋劑組腫瘤組織凋亡率為（24.481±15.483）%；PDT 組腫瘤組織凋亡率為（20.824±7.486）%；緩釋劑聯(lián)合 PDT 治療組腫瘤組織凋亡率為（35.614±15.190）%。緩釋劑組與 PDT 組比較無顯著性差異（P>0.05）（見圖 8-3，8-4），緩釋劑組與空白對照組及靜脈給藥組比較具有顯著性差異（P<0.05）（見圖 8-1，8-2，8-3），PDT 組與空白對照組比較具有顯著性差異（P>0.05）（見圖 8-4，8-1），緩釋劑聯(lián)合 PDT 治療組與其他各組比較具有顯著性差異（P<0.05）（見圖 8-5）。

【參考文獻】

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本文編號：2825516