目的 1.建立一種操作更加簡單、成活率高、生物相似性高的口腔鱗狀細(xì)胞癌動(dòng)物模型,為口腔腫瘤實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ); 2.采用光動(dòng)力學(xué)療法( photodynamic therapy,PDT )聯(lián)合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)緩釋劑治療口腔鱗癌,研究其在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡中是否具有協(xié)同和強(qiáng)化作用。 方法 采用局部植入瘤塊法建立100只兔Vx-2口腔鱗癌動(dòng)物模型,成功后隨機(jī)分為5組:A組,空白對照組;B組,靜脈給藥組;C組,緩釋劑組;D組,PDT組;E組,緩釋劑聯(lián)合PDT組。A組:不予任何處理;B組:全麻后耳緣靜脈注射2.5mg/ml氟尿嘧啶溶液30ml(75mg),注射速度控制為0.5ml/min;C組:將5-FU緩釋劑用專用植藥針按時(shí)鐘4個(gè)位點(diǎn)植入到腫瘤中,單點(diǎn)給藥不超過20mg,總劑量為75mg;D組:先從耳緣靜脈注入稀釋為1mg/ml的HPD0.3mg/kg,避光養(yǎng)殖24h后麻醉。照射時(shí)術(shù)區(qū)外用生理鹽水紗布覆蓋保護(hù),光纖末端距離腫瘤約2cm,波長630nm,光斑覆蓋腫瘤,激光功率密度為200mW/cm3,照射10min,能量密度為100J/cm2;E組:先局部植入5-FU緩釋劑(方法劑量同C組)然后予以激光照射,照射前24h靜脈注射HPD。接下來對各實(shí)驗(yàn)組兔子精神、飲食、活動(dòng)等行為學(xué)進(jìn)行觀察,連續(xù)五周測量腫瘤體積,五周后處死動(dòng)物取腫瘤組織做組織學(xué)觀察和免疫組化、流式細(xì)胞儀等來評價(jià)腫瘤抑瘤率、生長狀態(tài)、腫瘤細(xì)胞的凋亡率及腫瘤組織中p53基因蛋白表達(dá)情況來初步研究PDT聯(lián)合5-FU緩釋劑的療效,各組數(shù)據(jù)比較用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P0.05為具有顯著性差異。 結(jié)果 1. Vx-2腫瘤移植成功率較高,成瘤率百分之百,操作簡單,具有可重復(fù)性。 2.治療后連續(xù)觀察五周并測腫瘤體積,發(fā)現(xiàn)治療后第1周各組間腫瘤體積無明顯差異,第2周起空白對照組、靜脈給藥組和PDT組腫瘤生長較緩釋劑組和聯(lián)合治療組較快。聯(lián)合治療組兔子精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)等均較其他各組稍顯優(yōu)勢。 3.治療后第五周觀察并計(jì)算抑瘤率得:靜脈給藥組(39.9±15.9)%;緩釋劑組(73.8±22.3)%;PDT組(50.6±21.8)%;聯(lián)合治療組(93.6±19.5)%,聯(lián)合治療組抑瘤率明顯低于其他各組,與其他各組間比較具有顯著性差異(P0.05)。 4. HE染色鏡下觀察腫瘤組織為鱗狀細(xì)胞癌,聯(lián)合治療組較其他組腫瘤細(xì)胞增殖能力下降、核分裂像罕見、細(xì)胞大量死亡或凋亡、出現(xiàn)空泡樣變、核固縮等現(xiàn)象。 5.免疫組化測得各組p53基因蛋白陽性表達(dá)率為:空白對照組(60%)、靜脈給藥組(50%)、緩釋劑組(30%)、PDT組(45%)、聯(lián)合組(15%),聯(lián)合組明顯低于其他組,各組間比較具有顯著性差異(P0.05)。 6.流式細(xì)胞儀檢測腫瘤細(xì)胞凋亡率結(jié)果:空白對照組(5.05±1.19)%、靜脈給藥組(11.81±0.89)%、緩釋劑組(25.80±13.78)%、PDT組(20.32±11.24)%、聯(lián)合組(32.51±15.32)%,聯(lián)合組明顯高于其他各組,與其他組間比較具有顯著性差異(P0.05),緩釋劑組高于靜脈給藥組及空白對照組,組間比較均具有顯著性差異(P 0.05),PDT組與空白對照組和靜脈給藥組比較具有顯著性差異(P0.05),而緩釋劑組與PDT組比較則無顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論 采用Vx-2腫瘤組織塊移植法建立口腔鱗狀細(xì)胞癌操作簡單,成活率高,是一種較好的可供口腔腫瘤實(shí)驗(yàn)研究的動(dòng)物模型。在口腔鱗癌治療上5-FU緩釋劑較常規(guī)靜脈給藥在維持抗瘤有效濃度,治療療效上具有一定的優(yōu)勢,與PDT聯(lián)合應(yīng)用時(shí)在抑制腫瘤生長、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡上較其單獨(dú)應(yīng)用效果顯著。因此我們可以得出5-FU與PDT聯(lián)合應(yīng)用可能成為治療口腔鱗癌的一種新的臨床治療方法。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

15尿嘧啶約 圖 2 5-FU 緩釋系統(tǒng)劑及散裝劑兩種；管裝劑內(nèi)包裝為注射針用有效期三年；n derivative,HPD）為北京制藥工業(yè)研究所產(chǎn)）：250mg/支，上海海普制藥廠，購自合肥百P 和 DAB 試劑盒購自福州邁新產(chǎn)品； Kit：由安醫(yī)附院中心實(shí)驗(yàn)室提供；頜面外科病房提供；

B 20 50C 20 30D 20 45E 2010141117222132205252 1510.42 0.0343.4 流式細(xì)胞儀測腫瘤細(xì)胞凋亡率結(jié)果各組隨機(jī)取 10 個(gè)樣本的腫瘤組織上流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果得空白對照組腫瘤組織凋亡率為（5.109±1.641）%；靜脈給藥組腫瘤組織凋亡率為（11.977±0.552）%；緩釋劑組腫瘤組織凋亡率為（24.481±15.483）%；PDT 組腫瘤組織凋亡率為（20.824±7.486）%；緩釋劑聯(lián)合 PDT 治療組腫瘤組織凋亡率為（35.614±15.190）%。緩釋劑組與 PDT 組比較無顯著性差異（P>0.05）（見圖 8-3，8-4），緩釋劑組與空白對照組及靜脈給藥組比較具有顯著性差異（P<0.05）（見圖 8-1，8-2，8-3），PDT 組與空白對照組比較具有顯著性差異（P>0.05）（見圖 8-4，8-1），緩釋劑聯(lián)合 PDT 治療組與其他各組比較具有顯著性差異（P<0.05）（見圖 8-5）。

B 20 50C 20 30D 20 45E 2010141117222132205252 1510.42 0.0343.4 流式細(xì)胞儀測腫瘤細(xì)胞凋亡率結(jié)果各組隨機(jī)取 10 個(gè)樣本的腫瘤組織上流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果得空白對照組腫瘤組織凋亡率為（5.109±1.641）%；靜脈給藥組腫瘤組織凋亡率為（11.977±0.552）%；緩釋劑組腫瘤組織凋亡率為（24.481±15.483）%；PDT 組腫瘤組織凋亡率為（20.824±7.486）%；緩釋劑聯(lián)合 PDT 治療組腫瘤組織凋亡率為（35.614±15.190）%。緩釋劑組與 PDT 組比較無顯著性差異（P>0.05）（見圖 8-3，8-4），緩釋劑組與空白對照組及靜脈給藥組比較具有顯著性差異（P<0.05）（見圖 8-1，8-2，8-3），PDT 組與空白對照組比較具有顯著性差異（P>0.05）（見圖 8-4，8-1），緩釋劑聯(lián)合 PDT 治療組與其他各組比較具有顯著性差異（P<0.05）（見圖 8-5）。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2825516