背景：在傷口愈合過程中，通常會(huì)形成瘢痕，人類口腔黏膜的創(chuàng)傷修復(fù)同皮膚創(chuàng)傷比較愈合快，形成的瘢痕組織少。因此，口腔黏膜為我們提供了成體組織無瘢痕創(chuàng)傷修復(fù)的研究主體，其創(chuàng)傷愈合過程能夠?yàn)槠つw創(chuàng)傷修復(fù)的改善提供有價(jià)值的信息。創(chuàng)傷修復(fù)的每個(gè)時(shí)期都是生長因子，細(xì)胞，細(xì)胞外基質(zhì)之間相互作用的結(jié)果。生長因子對(duì)細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)起重要作用。本課題首先將大鼠口腔黏膜移植至大鼠腹部，待傷口愈合后，在移植部位和對(duì)側(cè)對(duì)應(yīng)部位制備切傷，傷后不同時(shí)間段取創(chuàng)傷部位標(biāo)本，檢測(cè)bFGF和EGF的表達(dá)情況，探尋皮膚、移植后的口腔黏膜自然創(chuàng)傷過程以及改變生長環(huán)境的創(chuàng)傷修復(fù)過程中bFGF和EGF的作用。 目的：研究改變基質(zhì)環(huán)境的口腔粘膜和皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程中的相關(guān)生長因子bFGF和EGF的表達(dá)情況，為臨床上瘢痕的防治，提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量提供依據(jù)。 材料與方法：將大鼠舌部口腔黏膜移植至大鼠右側(cè)腹部皮膚，移植后3周，在移植部位和對(duì)側(cè)對(duì)照部位制備大鼠皮膚全層切傷模型，并于傷后0h，12h，1d，2d，3d，4d，5d，6d以及7d處死大鼠，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫組織化學(xué)的方法，從基因和蛋白質(zhì)表達(dá)水平研究細(xì)胞因子bFGF和EGF的表達(dá)情況。 結(jié)果：1.創(chuàng)傷模型建立后，傷口的愈合時(shí)間實(shí)驗(yàn)組快于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組愈合瘢痕小而對(duì)照組瘢痕相對(duì)較大，兩組傷口在一周后均愈合，情況良好，無不良愈合情況。 2.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組bFGF在創(chuàng)傷后12h明顯表達(dá)增強(qiáng)(P≤0.05)，同對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1d時(shí)幾乎未表達(dá)，而3d時(shí)表達(dá)同對(duì)照組相似。實(shí)驗(yàn)組EGF在創(chuàng)傷后3d內(nèi)表達(dá)較低，3d至5d時(shí)表達(dá)逐漸增強(qiáng)，至5d時(shí)實(shí)驗(yàn)組表達(dá)明顯增強(qiáng)與對(duì)照組有顯著差異（P≤0.05）。 3．免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：bFGF表達(dá)廣泛，在上皮層及真皮層中均可見。在傷后12h時(shí)，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P≤0.05)，后表達(dá)逐漸降低，而至3d至7d內(nèi)，同對(duì)照組表達(dá)水平相當(dāng)，與實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果一致。EGF主要表達(dá)于上皮層。在傷后3d內(nèi)，兩組表達(dá)均較低(P≥0.05)，在5d時(shí)，實(shí)驗(yàn)組染色顆粒深于對(duì)照組且表達(dá)較多(P≤0.05)，而在7d時(shí)，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量明顯低于對(duì)照組（P≤0.05）。 結(jié)論：1.bFGF在創(chuàng)傷后24h表達(dá)明顯增強(qiáng)，說明舌粘膜的創(chuàng)傷修復(fù)過程中bFGF的迅速表達(dá)對(duì)于降低瘢痕的愈合以及指導(dǎo)EGF的表達(dá)，共同促進(jìn)傷口的愈合有重要意義。之后隨著傷口的逐漸愈合表達(dá)逐漸下降。表明bFGF在創(chuàng)傷愈合過程中可趨化并促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)細(xì)胞遷移和增值，促進(jìn)新生血管形成。 2.EGF在創(chuàng)傷后開始到第3天開始一直處于低表達(dá)狀態(tài)，后表達(dá)增強(qiáng)，至第5天時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組有明顯區(qū)別，這提示我們EGF的作用可能滯后，其在傷口肉芽組織增生，毛細(xì)血管形成后再主導(dǎo)發(fā)揮作用，促進(jìn)傷口愈合。其在促進(jìn)表皮細(xì)胞，成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)角膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞向創(chuàng)面遷移中發(fā)揮積極作用，在促進(jìn)損傷修復(fù)中扮演重要角色。 3.實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果和免疫組化的結(jié)果基本相符和，表明在基因水平的表達(dá)趨勢(shì)與免疫組化染色結(jié)果所示的蛋白表達(dá)趨勢(shì)基本一致。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R781.5
【部分圖文】：

圖 1.口腔黏膜移植實(shí)驗(yàn)：大鼠腹部取組織瓣，切取全層組織：將切取的舌粘膜組織移植到大鼠腹部缺損組織區(qū)域：將轉(zhuǎn)移過來的舌粘膜組織嚴(yán)密縫合在腹部缺損組織區(qū)域：將縫合后的轉(zhuǎn)移瓣組織進(jìn)行反包扎，促進(jìn)傷口愈合

圖 2. 腹部皮膚切傷模型A：6h 組；創(chuàng)傷模型初建立，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均滲血較多，傷口明顯B：12h 組；實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組傷口已無明顯滲血，實(shí)驗(yàn)組血供較好色澤紅潤C(jī)：1d 組；實(shí)驗(yàn)組傷口明顯可見比對(duì)照組小，傷口開始愈合，創(chuàng)面出現(xiàn)紅暈，有少量新鮮肉芽組織D：2d 組；實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組見血痂形成，創(chuàng)面面積縮小，表面未見明顯變化E：3d 組；實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組創(chuàng)口縮小，創(chuàng)緣邊緣出現(xiàn)不規(guī)則的肉芽組織，沿切緣排列F：4d 組；實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組傷口愈合中，肉芽組織明顯增生，創(chuàng)面被肉芽組織覆蓋，肉芽組織呈團(tuán)塊狀G：5d 組；實(shí)驗(yàn)組合對(duì)照組傷口愈合，見血痂形成，肉芽組織體積縮小，創(chuàng)面完全封閉H：6d 組；實(shí)驗(yàn)組愈合傷口明顯小于對(duì)照組，可見實(shí)驗(yàn)組傷口愈合速度快于對(duì)照組I：7d 組；實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組傷口均良好愈合，實(shí)驗(yàn)組傷口愈合瘢痕小于對(duì)照組，創(chuàng)面較對(duì)照組平整些

21圖 3.各細(xì)胞因子定量 PCR 結(jié)果FGF 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的實(shí)時(shí)表達(dá)結(jié)果。其中 3d 時(shí)，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組有統(tǒng)GF 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的實(shí)時(shí)表達(dá)結(jié)果，5d，7d 時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號(hào)：2822252