背景:上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、硫酸軟骨素蛋白聚糖4(chondrioditin ulfatepro-teoglycans 4,CSPG4),在惡性腫瘤及系統(tǒng)性疾病各領(lǐng)域研究中均有發(fā)現(xiàn)且發(fā)揮這相應的作用,但在口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cells carcinoma,OSCC)中的研究探索相對較少,本實驗擬檢測EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子SNAIL和TWIST 1及CSPG4在OSCC組織及OSCC癌旁組織的蛋白和mRNA水平,推測EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子SNAIL、TWIST 1以及CSPG4與OSCC的關(guān)系,為后期研究CSPG4在OSCC中的具體機制提供理論依據(jù)。目的:通過免疫組織化學及RTPCR檢測CSPG4、SNAIL、TWIST 1在OSCC組織中的表達,探討CSPG4、SNAIL、TWIST 1與OSCC的關(guān)系,為早期診斷、預防等方面提供理論依據(jù)。方法:(1)提取OSCC患者癌組織、癌旁組織中的CSPG4、SNAIL、TWIST 1的RNA,采用實時熒光定量PCR驗證mRNA在上述各項中的表達水平,進一步解析CSPG4、SNAIL、TWIST 1在OSCC中的作用機制。(2)采用免疫組織化學技術(shù),檢測在OSCC患者的癌組織和癌旁組織中CSPG4、SNAIL、TWIST 1蛋白表達。結(jié)果:(1)、CSPG4在OSCC癌組織中大量表達,染色評分較癌旁組織升高(P0.001),在癌組織中,CSPG4蛋白主要表達于癌細胞胞質(zhì)及胞膜廣泛表達,胞膜深染,角化珠不著色,癌旁正常組織CSPG4蛋白于癌旁正常上皮中少量表達。結(jié)合病例資料CSPG4的蛋白表達與患者年齡、民族、T分期及OSCC分化程度無關(guān)(P0.05),與性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān),男性OSCC患者的SCPG4蛋白表達水平比女性高(P0.05),OSCC伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組較非轉(zhuǎn)移組高(P0.01),臨床分期III-IV期較I-II期高(P0.05),在男性患者組、轉(zhuǎn)移組及III-IV期組陽性率較高,染色強度強,女性患者組、非轉(zhuǎn)移組及I-II期組陽性率較低,染色強度較弱。CSPG4 mRNA的表達與患者年齡、民族、T分期及OSCC分化程度無關(guān)(P0.05),與性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān),男性患者中表達比女性高(P0.05),轉(zhuǎn)移組較非轉(zhuǎn)移組高(P0.05),臨床分期III-IV期較I-II期高(P0.05)。(2)、Snail蛋白在OSCC組織中主要表達于癌巢組織,癌細胞胞質(zhì)及胞膜,胞膜深染,角化珠不著色,在癌旁正常組織中,Snail蛋白主要表達于正常上皮基底層,往淺層方向角化層方向變淺。OSCC組織的Snail蛋白染色評分較癌旁正常組織高(P0.01)。結(jié)合臨床病例信息,Snail蛋白的表達與患者性別、年齡、民族、T分期及OSCC分化程度無關(guān)(P0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及吸煙、飲酒情況相關(guān)(P0.05),應用實時熒光定量PCR法(qPCR)檢測Snail mRNA在轉(zhuǎn)錄組水平上的表達,Snail mRNA在OSCC組織中的相對表達量較癌旁組織高。SNAIL mRNA的表達與患者年齡、民族、T分期及OSCC分化程度無關(guān)(P0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、吸煙、飲酒相關(guān),轉(zhuǎn)移組較非轉(zhuǎn)移組升高(P0.05)。其中口腔鱗狀細胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高,吸煙組表達量較不吸煙組高(0.693-4.901),飲酒組表達量較不飲酒組表達量高,其余各組間未見明顯統(tǒng)計學差異。(3)、TIWST1蛋白在OSCC組織中主要表達于癌巢組織,胞膜深染,中央角化珠不著色,在癌旁正常組織中,主要表達于正常上皮基底層,往角化層方向逐漸變淺,總體染色較淺,OSCC組織的染色評分較癌旁正常組織高。結(jié)合臨床病例信息,TIWST1蛋白的表達與患者民族、飲酒、性別、T分期、年齡及OSCC分化程度無關(guān)(P0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及吸煙情況相關(guān)(P0.05),實時熒光定量PCR法(qPCR)檢測TWIST 1 mRNA在轉(zhuǎn)錄組水平上的表達,結(jié)合臨床病例信息,TWIST 1 mRNA的表達與患者民族、飲酒、性別、T分期、年齡及OSCC分化程度無關(guān)(P0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及吸煙情況相關(guān)(P0.05),OSCC癌組織中的表達量較癌旁組織高。結(jié)論:(1)、CSPG4在OSCC中的大量表達,表明CSPG4與OSCC之間存在正性調(diào)控作用,為OSCC早期診斷、預后等提供了可能,甚至在OSCC的治療中提供了一個靶向治療策略。(2)、EMT相關(guān)因子SNAIL及TWIST 1在OSCC中高表達,提示EMT與OSCC之間的關(guān)系十分密切。(3)、SNAIL及TWIST 1均與OSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),提示SNAIL及TWIST1甚至是EMT對于OSCC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移起促進的正性調(diào)控作用。(4)SNAIL及TWIST 1均與OSCC患者吸煙習慣相關(guān),提示吸煙可能成為EMT的誘因之一。(5)CSPG4作為EMT的上游調(diào)控蛋白之一,有可能成為抑制EMT及OSCC發(fā)展的重要因素。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

G4 在口腔鱗癌組織（OSCC）和癌旁組織（HC）中的蛋Protein expression of CSPG4 in oral squamous cell s (HC)癌組織中主要表達于癌巢組織，癌細胞胞質(zhì)，中央角化珠著色不明顯。結(jié)合臨床病理者年齡、民族、T 分期及 OSCC 分化程度結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)，男性患者中表達較非轉(zhuǎn)移組升高（P＜0.01），臨床分期 III-男性患者組、轉(zhuǎn)移組及 III-IV 期組陽性率、非轉(zhuǎn)移組及 I-II 期組陽性率較低，染色SPG4 蛋白主要表達于正常上皮基底層，

男 47 8.772±1.064女 33 8.103±1.258漢族 45 7.507±1.361壯族 35 8.009±1.483T1-T2 64 8.119±1.271T3-T4 16 6.156±0.819移轉(zhuǎn)移 27 8.317±1.244無轉(zhuǎn)移 53 6.567±1.001I-II 期 30 8.112±1.635III-IV 期 50 8.610±1.218高分化 66 7.762±1.521中、低分化 14 7.559±0.890吸煙 26 7.903±1.483不吸煙 54 7.642±1.408喝酒 26 7.961±1.419不喝酒 54 7.614±1.432

因子 SNAIL、TWIST1 在 OSCC 中表達的初步研究 實時熒光定量 PCR 法（qPCR）檢測 CSPG達 ， CSPG4 mRNA 在 OSCC 組 織 中02-10.804) ， CSPG4 mRNA 在 癌旁 組織00-1.006)，見表 2 及圖 3-1-3.表 2 OSCC 與癌旁正常組織中 CSPG4 mRNA 相對表parison of relative expression of CSPG4 mRNA in OSCC and 組類型 例數(shù) CSPG4 mRNA 相對表達量 SCC 組織 80 5.185(1.502-10.804)旁組織 80 1.001(1.000-1.006)

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本文編號：2821853