目的:本實驗旨在初步探討阿司匹林聯(lián)合維生素D3對口腔鱗癌細(xì)胞增殖和凋亡能力的潛在作用,為治療口腔癌提供新的策略和研究方向。方法:本實驗分別采用不同濃度的阿司匹林,維生素D3單獨或者聯(lián)合作用于人類口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株(CAL-27和SCC-15)。采用CCK-8檢測法檢測人口腔鱗癌細(xì)胞的增殖能力在不同濃度的藥物單獨或者聯(lián)合作用不同時間后受抑制的情況,流式細(xì)胞技術(shù)(Annexin VFITC/PI雙染法)檢測藥物單獨或者聯(lián)合作用對人口腔鱗癌細(xì)胞的凋亡能力的影響。采用Western blot法分析藥物作用對抗凋亡蛋白Bcl-2在人口腔鱗癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平的影響和對凋亡通道蛋白Erk1/2在人口腔鱗癌細(xì)胞內(nèi)的磷酸化水平的影響。結(jié)果:不同濃度的阿司匹林與維生素D3聯(lián)合作用,較空白對照組或單藥組,均可以顯著地降低CAL-27和SCC-15細(xì)胞的增殖率,而且能夠誘導(dǎo)更高的細(xì)胞凋亡率。同樣顯著地,阿司匹林和維生素D3聯(lián)合作用能夠抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)和下調(diào)Erk1/2蛋白的磷酸化水平。結(jié)論:本實驗初步證實了治療濃度范圍內(nèi)的阿司匹林和維生素D3聯(lián)用后具有協(xié)同或共性地殺傷兩種人類口腔鱗癌細(xì)胞株的生物活性。阿司匹林和維生素D3聯(lián)用后之所以能激發(fā)出強烈的抗口腔鱗癌細(xì)胞增殖和促進其凋亡的能力,與呈下調(diào)狀態(tài)的Bcl-2蛋白水平和Erk1/2的非磷酸化狀態(tài)密切相關(guān)。因此本實驗提示阿司匹林和維生素D3聯(lián)用可能成為一種有效的殺傷口腔鱗癌細(xì)胞的治療方式。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

圖 1 阿司匹林聯(lián)合維生素 D3 呈時間、劑量依賴性地抑制人口腔鱗癌細(xì)胞的增殖Fig. 1 The combination of ASA and vitamin D3 inhibited the proliferation of OSCC cells. (a) CAL-27 cells and (b) SCC-15 cells weretreated with ASA at indicated concentrations alone, and in combination with vitamin D3 for 24h, 48h and 72h, respectively. At eachtime point, the cell proliferation was detected using Cell-Counting Kit-8 assays. Data are presented as the mean ± SE from threeindependent experiments.2.2 檢測阿司匹林聯(lián)合維生素 D3 對人口腔鱗癌細(xì)胞作用后的 IC50如表 1 所示，阿司匹林聯(lián)合維生素 D3 作用于 CAL-27 細(xì)胞所產(chǎn)生的 IC50（殺死 50%細(xì)胞所需的藥物濃度）（0.97±0.06 mM, 0.33±0.02 mM, 0.21±0.01 mM）明顯低于阿司匹林單獨作用情況下的IC50（1.59±0.06mM,0.68±0.03mM,0.47±0.01mM）（p<0.01）。我們在表 1 中還發(fā)現(xiàn)阿司匹林單獨作用于 SCC-15 細(xì)胞所產(chǎn)生的 IC50（1.28±0.06 mM, 0.82±0.07 mM, 0.41±0.001 mM）也是遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于阿司匹林與維生素D3 聯(lián)合作用情況下所產(chǎn)生的 IC50（0.79±0.02 mM, 0.27±0.03 mM, 0.15±0.02 mM）（p<0.01）。

圖 2 阿司匹林聯(lián)合維生素 D3 誘導(dǎo)人口腔鱗癌細(xì)胞凋亡Fig. 2 Aspirin in combination with vitamin D3 induces apoptosis of human OSCC cells. The two cell lines were treated with 1 mMASA alone, 75 nM vitamin D3 alone and ASA/vitamin D3 for 48 h. The cells were harvested to analyze apoptosis using flow cytometry.(a) Annexin V FITC/PI assay of CAL-27 cells. (b) Annexin V-FITC/PI assay of SCC-15 cells. Numbers in the respective area indicatethe percentage of cells. (c) Apoptotic rates of CAL-27 and SCC-15 cells induced by ASA alone, vitamin D3 alone and ASA + vitaminD3. Results are expressed as the mean ± SE from three independent experiments.***p < 0.001, compared to untreated control;#p <0.01,##p < 0.001, compared to corresponding combined treatment.2.2 檢測阿司匹林聯(lián)合維生素 D3 對人口腔鱗癌細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白Bcl-2 的作用我們采用 Western-blot 法觀察抗凋亡蛋白 Bcl-2 在經(jīng)過阿司匹林（1 mM）、維生素 D3（75nM）單獨或聯(lián)合處理 48 小時后的人口腔鱗癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，阿司匹林或維生素 D3 單藥作用組均可以導(dǎo)致 CAL-27 細(xì)胞內(nèi)的 Bcl-2 表達(dá)水平較對照組明顯下降。然而，在 SCC-15 細(xì)胞內(nèi)，只有阿司匹林單藥作用組顯著地抑制了 Bcl-2 表達(dá)水平。更重要的結(jié)果表明對于這兩種口腔鱗癌細(xì)胞，維生素

圖 3 阿司匹林和維生素 D3 聯(lián)合下調(diào) Bcl-2 在人口腔鱗癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平irin and vitamin D3 downregulates the level of Bcl-2 in OSCC cells. (a) CAL- vitamin D3 alone and ASA + vitamin D3 for 48 h, respectively. The protein leveith corresponding antibodies. Protein levels were normalized to GAPDH. (b) Dent experiments.**p < 0.01,***p < 0.001, compared to combined treatment;#3 討論ellapoptosis）是公認(rèn)的細(xì)胞程序性死亡方式之一。的調(diào)控常常表現(xiàn)出抗凋亡的性質(zhì)。因此，研究者常至逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的抗調(diào)亡能力或者誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞應(yīng)用前景。同時癌癥的發(fā)生常常伴隨著細(xì)胞凋亡相Bcl-2 蛋白作為抗凋亡蛋白家族中重要的一員，參亡的環(huán)節(jié)[1-3]。因此抗凋亡蛋白 Bcl-2 可作為藥物殖的參考指標(biāo)。

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本文編號：2820434