成牙本質(zhì)細(xì)胞是牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體的特征性細(xì)胞,其功能是在牙齒發(fā)育期間和成熟牙內(nèi)生成牙本質(zhì),它是牙齒中唯一能在牙本質(zhì)形成與修復(fù)中起作用的細(xì)胞。因此,對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞的功能調(diào)控的研究有助于對(duì)牙齒發(fā)育、損傷與修復(fù)等過程的深入理解。 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(tumor necrosis factor receptor-associatefactor,TRAF6)是近年來備受重視的細(xì)胞漿內(nèi)的多功能信號(hào)分子,現(xiàn)己證實(shí),它不僅與骨代謝和胚胎正常發(fā)育密切相關(guān),還參與介導(dǎo)了LPS/IL-1、CD40和RANK的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。牙本質(zhì)作為牙齒硬組織,和骨組織的生物學(xué)特性有很多相似之處,那么TRAF6是否參與牙本質(zhì)的發(fā)育過程?它對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞的增殖、礦化及損傷修復(fù)功能究竟發(fā)揮何種調(diào)控作用?本研究對(duì)于這些問題進(jìn)行了探索性研究。具體內(nèi)容如下: 1.TRAF6在鼠牙胚組織和成牙本質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的研究 首先通過免疫組織化學(xué)染色的方法,在組織水平闡明了TRAF6幾乎在大鼠牙胚發(fā)育全過程呈動(dòng)態(tài)時(shí)空表達(dá)模式,尤其在成牙本質(zhì)細(xì)胞呈持續(xù)強(qiáng)陽性表達(dá)。接著運(yùn)用RT-PCR、免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光染色的手段,分別從基因和蛋白水平首次證實(shí)了TRAF6在永生化成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞MDPC-23中表達(dá),為進(jìn)一步研究TRAF6對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞功能的調(diào)控作用奠定了可靠的基礎(chǔ)。 2.RNAi法研究TRAF6對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞增殖、礦化過程的調(diào)控作用 RNAi技術(shù)是當(dāng)前研究基因功能的嶄新的強(qiáng)有力工具。第一步,我們首先成功構(gòu)建了2個(gè)pSUPER-TRAF6 siRNA的真核表達(dá)載體,并通過瞬
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

interactionmotisf，TIMs)，可分別與胞漿中T雙FZ，5，6相結(jié)合，其中刀刃嚇6的結(jié)合位點(diǎn)最靠近胞膜且具有高度特異性，TRA王6與TIM結(jié)合后可以激活下游信號(hào)I雙(I沼hnase)[6，7]。(2)CD40也是TNFR超家族的成員，它被激活后，胞漿段包含兩個(gè)獨(dú)立的TRAFs結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中Glu一235結(jié)合TRAF6，Thr一254結(jié)合TRAFZ，3，5，最終通過下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化不同的轉(zhuǎn)錄因子，189]。(3)IL一IR接受IL一1刺激或Toll樣受體(Toll一likereceptors，TLRs)超家族接受微生物產(chǎn)物如脂多糖(LPS)的刺激后，可能經(jīng)過Tol/IlL一1受體家族To(U幾一1erceptorf如11ily，11R)募集幾一1受體相關(guān)激酶IL一IR一assoeiatedkinases，IRAK)s并結(jié)合TARF6[’0，川，這一作用和果蠅中的Pelle一dTRAF活化途徑非蔚目側(cè)12]。最近新發(fā)現(xiàn)幾一1汀011樣受體超家族成員Ton樣受側(cè)沼(孔咫)可以不依賴m決欠s途徑而直接與TRAfl6結(jié)合引發(fā)其下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，[3l4]l。.總之，目前關(guān)于TRAF6上游分子相互作用機(jī)制仍是有待進(jìn)一步研究的熱門課題。

圖.2BTRAF6的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制示意圖(三)TRAF6的功能研究及其在牙科領(lǐng)域的研究成果基因敲除實(shí)驗(yàn)是系統(tǒng)地觀察某種基因的功能的良好方法。Nati0A等1999年發(fā)現(xiàn)TRAF6一/一的E14.5一17.5小鼠表現(xiàn)為嚴(yán)重的骨骼硬化癥，牙齒萌出缺陷，這些小鼠出生后身體短小且很少能存活2周以上129，30]。2000年有報(bào)道TRAF6一/一的El0.5一18.5小鼠表現(xiàn)出神經(jīng)管閉合不全、露腦畸形及中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常，這些小鼠常在胚胎期或出生后立即死亡[3‘]。2002年研究表明TARF6一人El5.5一18.5及出生后d5的小鼠表現(xiàn)為少汗性外胚層發(fā)育不全綜合征(hypohidrotieeetodemraldysplasia，HED)，包括表皮附件如皮脂腺、毛囊腺發(fā)育缺陷，而HED的小鼠模型及人類HED患者均表現(xiàn)有牙齒的缺失或形態(tài)異常[32l。2003年Aisuhsiohazama等[33]研究釉結(jié)節(jié)的小組通過原位雜交法觀察了小鼠牙胚早期發(fā)育過程中由牙板上皮增厚到鐘狀早期之間TRAFS的表

圖3RNAi作用機(jī)制示意圖此外，現(xiàn)已證實(shí)，轉(zhuǎn)錄后基因沉默P(TGS)現(xiàn)象還可以由另外一A(smalltempora卿NRA，stRNA)途徑亦即miNRA(microRNA)途徑[4’]，但是miNRA和siRNA引起PTGs的機(jī)制有所不同。在生化機(jī)制或能上，miR訓(xùn)A與siRNA是相當(dāng)類似的。它們的長度都約是二十個(gè)堿基，抑制基因表現(xiàn)的時(shí)候，大多是先變成單股RNA并且與其它蛋白質(zhì)形個(gè)復(fù)合體，即RNA一niducedslineeeocmPlxe(RISC)，之后再將與之互mRNA分解。但是它們兩者之間也有不同處，如前所述，SIRNA為雙鏈，中的一條反義鏈最終通過抑制基因轉(zhuǎn)錄和/或使mRN.A降解而抑制基，產(chǎn)生RNAIP/TGS。而miRNA最明顯的特征就是具有一個(gè)發(fā)夾的的單鏈(haiprni，即一條RNA中兩端有互補(bǔ)的序列，中間有一小段不

【引證文獻(xiàn)】

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1 王櫻澤;林鴻旺;洪水清;任邦鵬;;人牙髓細(xì)胞向成牙本質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化中細(xì)胞周期變化[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2008年01期

本文編號(hào)：2820093