牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)是公認(rèn)的牙周炎的主要致病菌之一,其產(chǎn)生的內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS)對(duì)牙周組織具有很高的毒性和抗原性,可導(dǎo)致牙周附著的喪失和牙槽骨的吸收。牙周韌帶細(xì)胞(Periodontal Ligament Cells,PDLCs)作為牙周韌帶內(nèi)主要的功能細(xì)胞,在牙周的愈合和再生中發(fā)揮著重要的作用。大量的研究表明,牙齦卟啉單胞菌內(nèi)毒素(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS)能通過(guò)誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)直接或間接地毒害PDLCs,且牙周病病變的發(fā)展與LPS的含量密切相關(guān)。血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)作為PDLCs潛在的促有絲分裂因子,在牙周組織的損傷愈合中發(fā)揮著重要的作用。 目的 研究不同濃度Pg-LPS單獨(dú)或聯(lián)合PDGF-BB共同作用于PDLCs后對(duì)其損傷模型愈合的影響,以及通過(guò)研究Pg-LPS對(duì)PDLCs在牙骨質(zhì)片上附著和增殖的影響,探討Pg-LPS在牙周組織修復(fù)再生中的作用。 方法 1.采用組織塊培養(yǎng)法體外培養(yǎng)人PDLCs,免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)波形絲蛋白以確定其組織學(xué)來(lái)源。取生長(zhǎng)良好的第4代PDLCs接種于12孔板,待細(xì)胞融合后制備成約8mm的圓形損傷模型,加入0、0.001、0.01、0.1、1和10μg/ml的Pg-LPS培養(yǎng)液培養(yǎng),3d后換成不含LPS的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),損傷后的第1、3、6、9、12d結(jié)晶紫染色觀察損傷區(qū)細(xì)胞愈合情況。乙酸溶解提取后,檢測(cè)損傷后各組細(xì)胞的數(shù)量變化;同時(shí),ELISA法檢測(cè)1d、3d、6d損傷愈合時(shí)PDLCs分泌IL-1β、IL-6、TNF-α水平的變化。 2.采用10ng/ml的PDGF-BB和Pg-LPS(0、1、10μg/ml)共同作用于PDLCs損傷模型,于損傷的第3d時(shí),換成不含LPS而只含有PDGF-BB的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),檢測(cè)損傷后的第1、3、6、9d各組細(xì)胞的數(shù)量及細(xì)胞覆蓋損傷區(qū)域的情況。 3.用含不同濃度(0、1、10μg/ml)Pg-LPS培養(yǎng)液培養(yǎng)PDLCs于牙骨質(zhì)片,24h、72h后用MTT法檢測(cè)PDLCs在牙骨質(zhì)片上的附著、增殖的細(xì)胞數(shù)量,掃描電鏡觀察其在牙骨質(zhì)片上附著、增殖的形態(tài)。AO/EB染色觀察不同濃度Pg-LPS對(duì)PDLCs凋亡的影響。 結(jié)果 1.通過(guò)組織塊法分離培養(yǎng)的PDLCs表達(dá)波形絲蛋白,屬于中胚層來(lái)源的細(xì)胞,具有良好的增殖能力。低濃度Pg-LPS(0.001-1μg/ml)對(duì)PDLCs損傷愈合時(shí)細(xì)胞數(shù)量的增殖影響不明顯(P＞0.05);而高濃度10μg/ml Pg-LPS對(duì)PDLCs的增殖有明顯的抑制作用(P＜0.05),延緩了PDLCs的損傷愈合。此外,10μg/mlPg-LPS組刺激PDLCs后,分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α水平也明顯高于其余各組(P＜0.05),而低濃度Pg-LPS(0.001-1μg/ml)組與對(duì)照組相比則無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 2.低濃度Pg-LPS(0.001-1μg/ml)對(duì)PDGF-BB促PDLCs損傷愈合無(wú)影響(P＞0.05);高濃度10μg/ml Pg-LPS抑制了PDGF-BB促PDLCs損傷愈合(P＜0.05)。 3.在附著實(shí)驗(yàn)和增殖實(shí)驗(yàn)中,高濃度10μg/ml Pg-LPS組PDLCs細(xì)胞數(shù)量明顯低于對(duì)照組(P＜0.05),而1μg/mlPg-LPS組PDLCs細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。同樣,10μg/ml Pg-LPS能誘導(dǎo)PDLCs的凋亡。 結(jié)論 1.Pg-LPS對(duì)PDLCs的增殖抑制作用與其濃度有密切關(guān)系。 2.Pg-LPS在一定的低濃度范圍內(nèi)(0.001-1μg/ml),不會(huì)影響PDLCs在牙骨質(zhì)片上的附著、增殖,提示在牙周炎治療進(jìn)行根面平整時(shí),通過(guò)大量的刮除牙骨質(zhì)來(lái)徹底地去除LPS可能是沒(méi)有必要的。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類(lèi)】：R78
【部分圖文】：

可見(jiàn)組織塊邊緣細(xì)胞呈漩渦狀、放射狀生長(zhǎng)(圖1一3)。損傷模型制備后，結(jié)晶紫染色可見(jiàn)，邊緣整齊，細(xì)胞中央?yún)^(qū)無(wú)細(xì)胞殘留(圖4)。圖1組織塊培養(yǎng)5d后，少量細(xì)胞從組織塊周?chē)纬?(x200) FigIA批rs山Ws， afeweellswereobtainedfromtissueexPlanteultore(x20())

組織塊培養(yǎng)7d后，可見(jiàn)大量的細(xì)胞從組織塊周?chē)纬?x100)

圖2組織塊培養(yǎng)7d后，可見(jiàn)大量的細(xì)胞從組織塊周?chē)纬?x100)Fig2After7days，moreeellswereseenaroundtissueexPlantculture(x100)

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 黃美香;環(huán)孢素A聯(lián)合脂多糖對(duì)牙周組織再生的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2818163