發(fā)布時間：2020-09-10 16:31

　　 目的：通過體外培養(yǎng)人牙髓干細胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs),觀察重組腺病毒介導的表皮生長因子(recombinant adenovirus mediated epidermal growth factor, rAd-EGF)轉染至hDPSCs后對其生長、增殖和凋亡的影響,為EGF對hDPSCs的作用提供實驗依據(jù),并為牙齒缺損與牙再生提供可能的新思路和新方法。方法：1.常規(guī)收集對數(shù)生長期的hDPSCs,將密度為1×105/ml的細胞懸液接種至6孔板中,每孔細胞懸液量為2ml,根據(jù)實驗目的分為空白組(只有hDPSCs和培養(yǎng)基)、陰性對照組(轉染rAd-EGFP的hDPSCs)和實驗組(轉染rAd-EGF的hDPSCs),待24h細胞貼壁后轉染rAd-EGFP與rAd-EGF,在72h后采用RT-PCR檢測rAd-EGF轉染hDPSCs后對EGF mRNA表達的影響情況。2.體外培養(yǎng)hDPSCs,常規(guī)收集對數(shù)生長期的hDPSCs,將密度為4×103/ml的細胞懸液接種于96孔板中,每孔細胞懸液量為200μl,根據(jù)實驗目的分為空白組、陰性對照組和實驗組。待24h細胞貼壁后轉染rAd-EGFP與rAd-EGF,在1、3、5、7、9、11d的同一時點,采用MTT比色法觀察rAd-EGF轉染hDPSCs后對其體外增值能力的影響。3.常規(guī)收集對數(shù)生長期的hDPSCs,將密度為3×106/ml的細胞懸液接種于6孔板中,每孔中的細胞貼壁后轉染rAd-EGFP與rAd-EGF,繼續(xù)培養(yǎng)48h,用流式細胞儀Annexin V-FITC/PI法檢測rAd-EGF轉染hDPSCs后的凋亡情況。結果：實驗組hDPSCs中EGFmRNA的表達水平相對于陰性對照組與空白組均明顯上調(diào)(P0.05)。與陰性對照組與空白組比較,實驗組hDPSCs體外增殖能力明顯升高,第1-7天升高明顯,有顯著性差異(P0.05),但7天后減弱,無顯著性差異(P0.05)。流式細胞Annexin V-FITC/PI法結果顯示在作用時間相同的情況下同陰性對照組與空白組相比,實驗組hDPSCs體外凋亡指數(shù)明顯降低(P0.05)。結論：rAd-EGF轉染入hDPSCs, EGF mRNA的表達量增加,在短期內(nèi)對其增殖能力具有促進作用,對其凋亡具有抑制作用。
【學位單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2012
【中圖分類】：R78

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本文編號：2816041