研究背景： 近年來(lái),臨床上對(duì)于口腔軟組織缺損時(shí)多采用自體游離皮瓣、肌皮瓣、局部轉(zhuǎn)移粘膜瓣等移植修復(fù)缺損,以保證移植物在口腔特殊環(huán)境中的成活；但這些方法的缺點(diǎn)也是不容忽視的：如移植后組織能否存活；組織量過(guò)大導(dǎo)致供區(qū)畸形；存活后的組織瓣保留供區(qū)的某些特性如毛發(fā)、汗腺等；二次創(chuàng)傷增加病人痛苦和病程等問(wèn)題。 隨著組織工程學(xué)的發(fā)展,膠原膜因?yàn)槠漭^好的生物相容性,可降解性,具有凝血作用,纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)有利于細(xì)胞的黏附等特點(diǎn),且有研究對(duì)體外細(xì)胞在幾種膜材料上的黏附、增殖和分化等進(jìn)行比較,結(jié)果顯示膠原膜的效果最好,膠原膜越來(lái)越被廣泛應(yīng)用。已經(jīng)廣泛地用作口腔軟組織缺損的修復(fù),取得了不同程度的效果。 在組織工程和創(chuàng)傷修復(fù)中,新生血管是至關(guān)重要的一步。新生血管可以為創(chuàng)口及時(shí)地運(yùn)送氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),利于創(chuàng)傷的修復(fù)。為了獲得更好的軟組織修復(fù)效果,研究者們嘗試將各種細(xì)胞因子應(yīng)用于軟組織缺損的修復(fù)中,其中堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)是重要的血管生長(zhǎng)因子之一。然而,由于單純的bFGF應(yīng)用在體內(nèi)擴(kuò)散太快,也容易被蛋白酶分解、半衰期短,因而不能在有效的時(shí)間內(nèi)作用于更多的靶細(xì)胞,其生物學(xué)效能難以得到充分地發(fā)揮。學(xué)者們?cè)鴩L試通過(guò)提高bFGF的使用劑量來(lái)促進(jìn)軟組織的修復(fù),然而,bFGF劑量太高,也會(huì)產(chǎn)生一系列的并發(fā)癥,如血小板減少癥,腎毒性,甚至激化某些潛在的惡性細(xì)胞等等。目前多將其與載體結(jié)合應(yīng)用。 而生長(zhǎng)因子與載體材料的結(jié)合方式主要有兩種,一種是靶向結(jié)合；另一種是物理簡(jiǎn)單吸附。靶向結(jié)合能限制生長(zhǎng)因子的自由擴(kuò)散,降低其使用劑量,達(dá)到高效率利用生長(zhǎng)因子的目的。 中國(guó)科學(xué)研究院Jianwu Dai等發(fā)現(xiàn)：將一段含七個(gè)氨基酸的寡肽即膠原結(jié)合域(collagen-binding domain, CBD)和bFGF的N端結(jié)合,形成具有與膠原靶向結(jié)合能力的CBD-bFGF;同時(shí)表達(dá)不帶膠原結(jié)合域的天然bFGF,即NAT-bFGF。通過(guò)促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖的MTT分析實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其生物活性,結(jié)果提示CBD-bFGF與NAT-bFGF均有活性,兩者生物活性相當(dāng)。通過(guò)膠原鋪底的ELISA法檢測(cè)其膠原結(jié)合能力,結(jié)果提示CBD-bFGF有特異的膠原結(jié)合能力,其膠原結(jié)合能力高于NAT-bFGF。 所以,目前研究的熱點(diǎn)是將bFGF吸附、粘接、載負(fù)于載體上,建立穩(wěn)定的bFGF釋放系統(tǒng),減少bFGF的使用劑量,減少bFGF的滲漏以提高植入位點(diǎn)局部的濃度,降低并發(fā)癥的發(fā)生率,使其使用效能最優(yōu)化。 目的： 鑒于以上問(wèn)題和爭(zhēng)議,本研究將低劑量的bFGF與膠原結(jié)合域結(jié)合形成具有膠原靶向結(jié)合能力的生長(zhǎng)因子,再將其與膠原膜載體復(fù)合,形成穩(wěn)定的緩慢釋放系統(tǒng),探討其在大鼠硬腭軟組織缺損模型中的修復(fù)作用,為有效的使用生長(zhǎng)因子在軟組織創(chuàng)面愈合中的作用提供理論依據(jù)及實(shí)踐參考。 方法： 選用6周齡近交系SPF級(jí)雄性Wistar大鼠96只,體重約160-200g。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成4組：A、B、C、D,每組24只動(dòng)物。每只大鼠于硬腭部第一磨牙近中至第三磨牙遠(yuǎn)中的軟組織中央用環(huán)形切齦鉆作一直徑為3mm的圓形缺損,A組植入結(jié)合bFGF/膠原膜；B組植入游離bFGF/膠原膜；C組植入膠原膜；D組不植入膠原膜(空白對(duì)照組)。分別于術(shù)后1、2、4、8周每組各處死動(dòng)物6只。術(shù)后行大體觀察、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)觀察,所有數(shù)據(jù)用SPSSl3.0分析軟件進(jìn)行處理。 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)后生長(zhǎng)恢復(fù)良好,無(wú)動(dòng)物死亡,手術(shù)創(chuàng)口無(wú)炎癥感染,均達(dá)到Ⅰ期愈合,膠原膜無(wú)排斥反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)觀察期間術(shù)區(qū)無(wú)明顯紅腫、無(wú)化膿。 2.術(shù)后3天見(jiàn)膠原膜呈淡黃色,緊貼骨面,未降解。1周時(shí)部分縫線脫落,四組創(chuàng)面均未完全愈合,創(chuàng)緣無(wú)明顯紅腫,無(wú)異常滲出液,膠原膜部分降解呈淡黃色。2周時(shí),四組創(chuàng)面均完全愈合,肉眼觀察無(wú)差異。4周和8周時(shí)四組創(chuàng)面完全愈合。 3.HE染色可觀察上皮層形成情況,成纖維細(xì)胞,炎癥細(xì)胞,新生血管,膠原膜等。1周時(shí),可見(jiàn)四組上皮層未完全形成,結(jié)合bFGF/膠原膜組、游離bFGF/膠原膜組、膠原膜組可見(jiàn)部分未降解的膠原膜,結(jié)合bFGF/膠原膜組新生血管,成纖維細(xì)胞和炎癥細(xì)胞較其他三組多,且血管管腔較大。2周時(shí),可見(jiàn)四組上皮層形成,結(jié)合bFGF/膠原膜組、游離bFGF/膠原膜組、膠原膜組可見(jiàn)膠原膜大部分吸收,結(jié)構(gòu)不清。結(jié)合bFGF/膠原膜組上皮層形成,上皮釘突粗大,大量新生血管形成,管腔較大；游離bFGF/膠原膜組和膠原膜組上皮層層次清晰,少量上皮釘突形成,較多新生血管形成；空白對(duì)照組上皮層形成,無(wú)明顯上皮釘突形成,較少新生血管形成。4、8周時(shí),膠原膜完全吸收,各組上皮層均形成,上皮釘突明顯。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果： (1)上皮組織兩端間的距離分析： 1周時(shí)各處理組間進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)合bFGF/膠原膜組,游離bFGF/膠原膜組,膠原膜組,空白對(duì)照組上皮組織兩端間的距離差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=18.904,0.001)。即上皮組織兩端間的距離結(jié)合bFGF/膠原膜組最短,空白對(duì)照組最長(zhǎng),游離bFGF/膠原膜組和膠原膜組相當(dāng),居中。(2)創(chuàng)面愈合率分析： 1周時(shí)各處理組間進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)合bFGF/膠原膜組,游離bFGF/膠原膜組,膠原膜組,空白對(duì)照組創(chuàng)面愈合率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=18.904,P0.001)。即創(chuàng)面愈合率結(jié)合bFGF/膠原膜組最大,空白對(duì)照組最小,游離bFGF/膠原膜組和膠原膜組相當(dāng),居中。 (3)新生血管數(shù)目分析： 經(jīng)析因方差分析,結(jié)果顯示不同時(shí)間段間新生血管數(shù)目差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=161.167,P0.001)；不同處理組間新生血管數(shù)目差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=114.871,P0.001)。不同時(shí)間段和不同處理組兩因素間有交互作用(F=17.792,P0.001)。故分別于每一時(shí)間段對(duì)四個(gè)處理組的新生血管數(shù)目進(jìn)行單因素方差分析比較。 1、2和4周時(shí)四組新生血管數(shù)目差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),結(jié)合bFGF/膠原膜組在各個(gè)時(shí)間段的血管數(shù)目都是最多的,其次是游離bFGF/膠原膜組和膠原膜組,空白對(duì)照組新生血管數(shù)目最少。8周時(shí),四組新生血管數(shù)目差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.782)。從1周到8周,各組新生血管數(shù)目均先增多再減少,2周時(shí)達(dá)到高峰,后又逐漸減少。 (4)肌成纖維細(xì)胞平均光密度值分析： 經(jīng)析因方差分析,結(jié)果顯示不同時(shí)間段間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=939.366,P0.001)；不同處理組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=90.683,P0.001)。不同時(shí)間段和不同處理組兩因素間有交互作用(F=11.969,P0.001)。故分別于每一時(shí)間段的四個(gè)處理組進(jìn)行單因素方差分析比較。 1、2和4周時(shí)四組肌成纖維細(xì)胞平均光密度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),結(jié)合bFGF/膠原膜組在各個(gè)時(shí)間段的肌成纖維細(xì)胞平均光密度值都是最低的,其次是游離bFGF/膠原膜組,膠原膜組和空白對(duì)照組是最高的。8周時(shí),四組肌成纖維細(xì)胞平均光密度值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.392)。從1周到8周,各組肌成纖維細(xì)胞平均光密度值均先增加再減少,2周時(shí)達(dá)到高峰,后又逐漸減少。 結(jié)論： 1.將膠原結(jié)合域與bFGF結(jié)合形成具有與膠原靶向結(jié)合能力的bFGF,再將其復(fù)合到膠原膜后,形成了緩釋系統(tǒng)持續(xù)釋放bFGF,有更好的促血管新生作用,組織修復(fù)獲得良好的血管化情況,利于軟組織缺損的再生重建。2.結(jié)合bFGF/膠原膜促進(jìn)大鼠口腔軟組織缺損的修復(fù),加快創(chuàng)面愈合。3.結(jié)合bFGF/膠原膜在軟組織缺損愈合過(guò)程中,肌成纖維細(xì)胞平均光密度值最低,肌成纖維細(xì)胞含量最少,能減少組織愈合過(guò)程中的創(chuàng)面收縮,改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R782.2
【部分圖文】：

靶向結(jié)合在材料上;另一種是物理簡(jiǎn)單吸附，游離的生長(zhǎng)因子。這種簡(jiǎn)單吸附的生長(zhǎng)因子與材料結(jié)合移植到體內(nèi)后，由于游離的生長(zhǎng)因子半衰期短，隨著體液的浸潤(rùn)和流動(dòng)易造成生長(zhǎng)因子的擴(kuò)散，如圖1所示。而這種擴(kuò)散會(huì)有幾方面的問(wèn)題:擴(kuò)散的生長(zhǎng)因子為機(jī)體帶來(lái)潛在的風(fēng)險(xiǎn);擴(kuò)散使生長(zhǎng)因子的濃度大大降低，達(dá)不到修復(fù)效果，而為了加強(qiáng)修復(fù)效果，則需要反復(fù)用藥，同時(shí)增加了

Figlsimple一 absorPtionbetweengrow-thfactorsandbiomaterialll4]通過(guò)特定的方式，將生長(zhǎng)因子靶向結(jié)合在材料上，限制了生長(zhǎng)因子的自由擴(kuò)散，使其與材料形成緩釋系統(tǒng)。如圖2所示。由此得出:此種材料移植到體內(nèi)后，生長(zhǎng)因子的自由擴(kuò)散可以得到限制，削弱了生長(zhǎng)因子的自由擴(kuò)散對(duì)機(jī)體的潛在風(fēng)險(xiǎn);同時(shí)可以大大降低生長(zhǎng)因子的使用量，降低治療成本，達(dá)到高效率利用生長(zhǎng)因子的目的。圖2生長(zhǎng)因子與材料靶向結(jié)合 FigZTa嗯eted一 bindingbetweengrowth幾 erorsandbiomatersalll41中國(guó)科學(xué)研究院 JianwuDai等〔，習(xí)人發(fā)現(xiàn):通過(guò)基因工程方法，將一段含七個(gè)氨基酸的寡膚即膠原結(jié)合域(eollagen一 bindingdomain，CBD)和bFGF的N端結(jié)合，可形成具有膠原靶向結(jié)合能力的CBD一bFGF，同時(shí)表達(dá)不帶膠原結(jié)合域的天然bFGF

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【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張舒;BMP、FGF以明膠海綿為載體促進(jìn)大鼠腭裂術(shù)后愈合作用的研究[D];吉林大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2812811